Молекул илрүүлэх аргууд нь дээжинд байгаа ул мөрийн хэмжээг олшруулах замаар их хэмжээний нуклейн хүчил үүсгэх чадвартай байдаг. Энэ нь мэдрэмтгий илрүүлэлтийг идэвхжүүлэхэд ашигтай боловч лабораторийн орчинд олшруулах аэрозоль тархах замаар бохирдох магадлалыг нэмэгдүүлдэг. Туршилт хийхдээ урвалж, лабораторийн тоног төхөөрөмж, ажлын байрны бохирдлоос зайлсхийх арга хэмжээ авч болно, учир нь ийм бохирдол нь хуурамч эерэг (эсвэл хуурамч сөрөг) үр дүн гаргаж болзошгүй юм.
Бохирдлын магадлалыг бууруулахын тулд лабораторийн сайн туршлагыг үргэлж хэрэгжүүлэх хэрэгтэй. Тодруулбал, дараах зүйлсийн талаар урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ авах шаардлагатай.
1. Урвалж бодисуудтай харьцах
2. Ажлын байр болон тоног төхөөрөмжийн зохион байгуулалт
3. Зориулсан молекулын орон зайг ашиглах, цэвэрлэх зөвлөгөө
4. Молекул биологийн ерөнхий зөвлөгөө
5. Дотоод хяналт
6. Ном зүй
1. Урвалж бодисуудтай харьцах
Аэрозоль үүсэхээс зайлсхийхийн тулд урвалжийн хоолойг нээхээсээ өмнө богино хугацаанд центрифугээр хийнэ. Олон удаа хөлдөх гэсэлт болон үндсэн нөөцийн бохирдлоос зайлсхийхийн тулд урвалжийн хэмжээг тохируулна. Бүх урвалж болон урвалжийн хоолойг тодорхой шошголж, огноог нь тэмдэглэж, бүх туршилтад ашигласан урвалжийн багц болон цувралын дугаарын бүртгэлийг хөтлөнө. Шүүлтүүрийн үзүүр ашиглан бүх урвалж болон дээжийг пипеткээр хийнэ. Худалдан авахаасаа өмнө шүүлтүүрийн үзүүр нь ашиглах пипеткийн брэндтэй тохирч байгаа эсэхийг үйлдвэрлэгчээс баталгаажуулахыг зөвлөж байна.
2. Ажлын байр болон тоног төхөөрөмжийн зохион байгуулалт
Ажлын байрыг цэвэр хэсгээс (PCR-ийн өмнөх) бохир хэсэг хүртэл (PCR-ийн дараах) нэг чиглэлд ажлын урсгал явагдахаар зохион байгуулах хэрэгтэй. Дараах ерөнхий урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ нь бохирдлын магадлалыг бууруулахад тусална. Мастермикс бэлтгэх, нуклейн хүчлийн гарган авах болон ДНХ-ийн загвар нэмэх, олшруулсан бүтээгдэхүүнийг олшруулах, боловсруулах, бүтээгдэхүүний шинжилгээ хийх, жишээлбэл, гель электрофорез хийхэд зориулж тусдаа өрөө, эсвэл хамгийн багадаа бие махбодийн хувьд тусдаа хэсгүүдтэй байх.
Зарим нөхцөлд 4 тусдаа өрөөтэй байх нь хэцүү байдаг. Боломжит боловч хүсээгүй сонголт бол мастер хольц бэлтгэх ажлыг ламинар урсгалын шүүгээ гэх мэт тусгаарлах хэсэгт хийх явдал юм. Үүдний PCR олшруулалтын хувьд мастер хольцыг хоёр дахь шатны урвалд бэлтгэх ажлыг мастер хольц бэлтгэх "цэвэр" хэсэгт бэлтгэх ёстой боловч анхдагч PCR бүтээгдэхүүнээр тарих ажлыг олшруулалтын өрөөнд, боломжтой бол тусгай тусгаарлах хэсэгт (жишээлбэл, ламинар урсгалын шүүгээ) хийх хэрэгтэй.
Өрөө/талбай бүрт тодорхой шошготой пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хоолойн тавиур, эргүүлэг, центрифуг (хамааралтай бол), үзэг, ерөнхий лабораторийн урвалж, лабораторийн халат, бээлийний хайрцаг зэргийг тус тусад нь ажлын байрандаа үлдээх шаардлагатай. Зориулалтын хэсгүүдийн хооронд шилжихдээ гараа угааж, бээлий, лабораторийн халатыг солих шаардлагатай. Урвалж, тоног төхөөрөмжийг бохир газраас цэвэр газар руу зөөж болохгүй. Урвалж эсвэл тоног төхөөрөмжийг хойш нь зөөх шаардлагатай онцгой тохиолдолд эхлээд 10% натрийн гипохлоритоор ариутгаж, дараа нь ариутгасан усаар арчих шаардлагатай.
Тэмдэглэл
10%-ийн натрийн гипохлоритын уусмалыг өдөр бүр шинээр нь бэлтгэх шаардлагатай. Ариутгахад хэрэглэхдээ хамгийн багадаа 10 минутын турш хэрэглэх шаардлагатай.
Эсвэл орон нутгийн аюулгүй байдлын зөвлөмжид натрийн гипохлорит хэрэглэхийг зөвшөөрдөггүй эсвэл натрийн гипохлорит нь тоног төхөөрөмжийн металл эд ангийг ариутгахад тохиромжгүй тохиолдолд ДНХ-г устгадаг гадаргуугийн ариутгагч гэдгээрээ баталгаажсан худалдаанд байгаа бүтээгдэхүүнийг ашиглаж болно.
Хамгийн тохиромжтой нь ажилтнууд нэг чиглэлтэй ажлын урсгалын ёс зүйг дагаж мөрдөж, бохир газраас (PCR-ийн дараа) цэвэр газар руу (PCR-ийн өмнөх) нэг өдөр буцаж очихгүй байх ёстой. Гэсэн хэдий ч үүнийг зайлшгүй хийх боломжгүй тохиолдол байж болно. Ийм тохиолдолд ажилтнууд гараа сайтар угааж, бээлий солих, зориулалтын лабораторийн халат өмсөх, лабораторийн ном гэх мэт өрөөнөөс дахин гаргахыг хүссэн тоног төхөөрөмжөө оруулахгүй байх ёстой. Молекулын аргуудын талаарх ажилтнуудын сургалтад ийм хяналтын арга хэмжээг онцлон тэмдэглэх хэрэгтэй.
Хэрэглэсний дараа вандан сандлын зайг 10% натрийн гипохлорит (үлдэгдэл цайруулагчийг арилгахын тулд ариутгасан ус), 70% этанол эсвэл худалдаанд байгаа ДНХ-г устгадаг баталгаажсан ариутгагчаар цэвэрлэх хэрэгтэй. Хамгийн тохиромжтой нь цацраг туяагаар ариутгахын тулд хэт ягаан туяаны (ХЯ) чийдэн суурилуулах хэрэгтэй. Гэсэн хэдий ч лабораторийн ажилтнуудын хэт ягаан туяанд өртөхийг хязгаарлахын тулд хэт ягаан туяаны чийдэнг хаалттай ажлын хэсэгт, тухайлбал аюулгүйн шүүгээнд ашиглах хэрэгтэй. Дэнлүү үр дүнтэй хэвээр байхын тулд хэт ягаан туяаны чийдэнгийн арчилгаа, агааржуулалт, цэвэрлэгээний талаар үйлдвэрлэгчийн зааврыг дагаж мөрдөнө үү.
Хэрэв натрийн гипохлоритын оронд 70% этанол хэрэглэж байгаа бол ариутгалыг бүрэн гүйцэд хийхийн тулд хэт ягаан туяагаар шарах шаардлагатай болно.
Хуйлрал болон центрифугийг натрийн гипохлоритоор цэвэрлэж болохгүй; үүний оронд 70% этанолоор арчиж, хэт ягаан туяанд өртүүлэх эсвэл ДНХ-г устгадаг ариутгагч ашиглана уу. Асгарсан тохиолдолд цэвэрлэгээний талаар дэлгэрэнгүй зөвлөгөө авахыг хүсвэл үйлдвэрлэгчээс лавлана уу. Хэрэв үйлдвэрлэгчийн заавар зөвшөөрвөл пипеткийг автоклаваар тогтмол ариутгах хэрэгтэй. Хэрэв пипеткийг автоклавт хийж чадахгүй бол 10% натрийн гипохлоритоор (дараа нь ариутгасан усаар сайтар арчина) эсвэл ДНХ-г устгадаг ариутгагчаар цэвэрлэж, дараа нь хэт ягаан туяанд өртөхөд хангалттай.
Өндөр хувьтай натрийн гипохлоритоор цэвэрлэх нь тогтмол хийвэл пипеткийн хуванцар болон металлыг гэмтээж болзошгүй; эхлээд үйлдвэрлэгчийн зөвлөмжийг шалгана уу. Бүх тоног төхөөрөмжийг үйлдвэрлэгчийн зөвлөсөн хуваарийн дагуу тогтмол тохируулга хийх шаардлагатай. Тохируулгын хуваарийг дагаж мөрдөх, нарийвчилсан бүртгэл хөтлөх, үйлчилгээний шошгыг тоног төхөөрөмж дээр тодорхой харуулах үүрэгтэй томилогдсон хүн байх ёстой.
3. Зориулсан молекулын орон зайг ашиглах, цэвэрлэх зөвлөгөө
Урьдчилсан PCR: Урвалжны аликвот / мастер холимог бэлтгэх: Энэ нь молекулын туршилт бэлтгэхэд ашигладаг бүх зайнаас хамгийн цэвэрхэн байх ёстой бөгөөд хэт ягаан туяагаар тоноглогдсон ламинар урсгалын шүүгээ байх нь зүйтэй. Дээж, гаргаж авсан нуклейн хүчил болон олшруулсан PCR бүтээгдэхүүнийг энэ хэсэгт авч явах ёсгүй. Олшруулсан урвалжуудыг хөлдөөгчинд (эсвэл үйлдвэрлэгчийн зөвлөмжийн дагуу хөргөгчинд) ижил зориулалтын зайд, ламинар урсгалын шүүгээ эсвэл PCR-ийн өмнөх хэсгийн хажууд хадгалах ёстой. PCR-ийн өмнөх хэсэг эсвэл ламинар урсгалын шүүгээнд орох бүрт бээлийг солих хэрэгтэй.
ПГУ-ын өмнөх хэсэг буюу ламинар урсгалын шүүгээг хэрэглэхийн өмнө болон дараа дараах байдлаар цэвэрлэнэ: Шүүгээнд байгаа бүх зүйлийг, тухайлбал пипетк, үзүүрийн хайрцаг, эргүүлэг, центрифуг, хоолойн тавиур, үзэг гэх мэтийг 70% этанол эсвэл ДНХ-г устгадаг ариутгагчаар арчиж хатаана. Хаалттай ажлын талбай, тухайлбал ламинар урсгалын шүүгээний хувьд бүрхүүлийг 30 минутын турш хэт ягаан туяанд байлгана.
Тэмдэглэл
Урвалжийг хэт ягаан туяанд бүү өртүүл; цэвэр болсны дараа л шүүгээнд оруулна уу. Хэрэв урвуу транскрипцийн ПГУ хийж байгаа бол гадаргуу болон тоног төхөөрөмжийг хүрэлцэх үед РНХ-г задалдаг уусмалаар арчих нь тустай байж болно. Энэ нь РНХ-ийн ферментийн задралаас үүдэлтэй хуурамч сөрөг үр дүнгээс зайлсхийхэд тустай байж болно. Ариутгасны дараа болон мастер хольц бэлтгэхийн өмнө бээлийг дахин сольж, шүүгээг ашиглахад бэлэн болгоно.
Урьдчилсан PCR: Нуклейн хүчлийн хандлалт/загвар нэмэх:
Нуклейн хүчлийг тусдаа пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хоолойн тавиур, шинэ бээлий, лабораторийн халат болон бусад тоног төхөөрөмжийг ашиглан хоёр дахь зориулалтын газарт гаргаж авч, боловсруулах ёстой. Энэ хэсэг нь мастер холимог хоолой эсвэл хавтангуудад загвар, хяналт болон чиг хандлагын шугам нэмэх зориулалттай. Шинжилж буй гаргаж авсан нуклейн хүчлийн дээжийг бохирдуулахаас зайлсхийхийн тулд эерэг хяналт эсвэл стандарттай харьцахаас өмнө бээлийгээ сольж, тусдаа пипетк ашиглахыг зөвлөж байна. ПГУ урвалж болон олшруулсан бүтээгдэхүүнийг энэ хэсэгт пипеткээр хийж болохгүй. Дээжийг ижил хэсэгт байрлах зориулалтын хөргөгч эсвэл хөлдөөгчид хадгалах ёстой. Дээжийн ажлын талбарыг мастер холимогтой адил аргаар цэвэрлэх хэрэгтэй.
PCR-ийн дараах: Олшруулсан бүтээгдэхүүнийг олшруулах болон боловсруулах
Энэхүү зориулалтын зай нь олшруулалтын дараах процессуудад зориулагдсан бөгөөд ПГУ-ын өмнөх хэсгүүдээс физикийн хувьд тусдаа байх ёстой. Энэ нь ихэвчлэн термоциклер болон бодит цагийн платформуудыг агуулдаг бөгөөд хэрэв үүрлэсэн ПГУ хийж байгаа бол 1-р тойргийн ПГУ бүтээгдэхүүнийг 2-р тойргийн урвалд нэмэх ламинар урсгалын кабинеттай байх нь хамгийн тохиромжтой. Бохирдлын эрсдэл өндөр тул ПГУ-ын урвалжууд болон гаргаж авсан нуклейн хүчилтэй энэ хэсэгт харьцаж болохгүй. Энэ хэсэгт бээлий, лабораторийн халат, хавтан болон хоолойн тавиур, пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хогийн сав болон бусад тоног төхөөрөмж тусдаа байх ёстой. Хоолойг нээхээс өмнө центрифугээр хийх ёстой. Дээжийн ажлын талбарыг мастер холих зайтай адил аргаар цэвэрлэх хэрэгтэй.
PCR-ийн дараах бүтээгдэхүүн: Бүтээгдэхүүний шинжилгээ
Энэ өрөө нь гель электрофорезын сав, цахилгаан тэжээлийн багц, хэт ягаан туяаны трансиллюминатор болон гель баримтжуулалтын систем гэх мэт бүтээгдэхүүн илрүүлэх тоног төхөөрөмжид зориулагдсан. Энэ хэсэгт бээлий, лабораторийн халат, хавтан болон хоолойн тавиур, пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, сав болон бусад тоног төхөөрөмж тусдаа байх ёстой. Ачаалах будагч бодис, молекулын маркер болон агарозын гель, буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс бусад ямар ч урвалжийг энэ хэсэгт оруулж болохгүй. Дээжийн ажлын талбарыг мастер холих зайтай адил аргаар цэвэрлэх ёстой.
Чухал тэмдэглэл
Хэрэв PCR-ийн дараах өрөөнд ажил аль хэдийн хийгдсэн бол PCR-ийн өмнөх өрөөнүүдэд тухайн өдөр орох ёсгүй. Хэрэв үүнээс зайлсхийх боломжгүй бол эхлээд гараа сайтар угааж, өрөөндөө тусгай лабораторийн халат өмссөн эсэхийг шалгаарай. Хэрэв лабораторийн ном, бичиг баримтыг PCR-ийн дараах өрөөнд ашиглаж байсан бол PCR-ийн өмнөх өрөөнүүдэд авч явах ёсгүй; шаардлагатай бол протокол/дээжийн үнэмлэх гэх мэт давхардсан хэвлэмэл хуулбарыг аваарай.
4. Молекул биологийн ерөнхий зөвлөгөө
Шинжилгээнд саад учруулахаас зайлсхийхийн тулд нунтаггүй бээлий хэрэглээрэй. Бохирдлыг бууруулахын тулд зөв пипетк хийх арга маш чухал. Буруу пипетк хийснээр шингэн тараах үед цацагдах, аэрозоль үүсэхэд хүргэдэг. Зөв пипетк хийх сайн туршлагыг дараах холбоосуудаас олж болно: Гилсон пипетк хийх гарын авлага, Аначемийн пипетк хийх аргын видео бичлэгүүд, Онгойлгохоос өмнө центрифугээр цоожлох, цацагдахаас сэргийлж болгоомжтой нээнэ үү. Бохирдуулагч орохоос сэргийлж хэрэглэсний дараа цоожийг нэн даруй хаа.
Олон урвал явуулахдаа урвалжийн шилжилтийн тоог багасгаж, бохирдлын аюулыг бууруулахын тулд нийтлэг урвалжууд (жишээ нь ус, dNTP, буфер, праймер болон фермент) агуулсан нэг мастер холимог бэлтгэнэ. Мастер холимгийг мөс эсвэл хүйтэн блок дээр байрлуулахыг зөвлөж байна. Халуун асаах ферментийг ашиглах нь өвөрмөц бус бүтээгдэхүүний үйлдвэрлэлийг бууруулахад тусалж болно. Флуоресцент датчик агуулсан урвалжуудыг задралаас зайлсхийхийн тулд гэрлээс хамгаална.
5. Дотоод хяналт
Бүх урвалд загваргүй хяналт, тоон урвалын олон цэгийн титрлэлтийн шугамтай хамт сайн тодорхойлогдсон, баталгаажсан эерэг ба сөрөг хяналтуудыг оруулна уу. Эерэг хяналт нь бохирдлын эрсдэл учруулахаар тийм хүчтэй байх ёсгүй. Нуклейн хүчлийн олборлолт хийхдээ эерэг ба сөрөг олборлолтын хяналтуудыг оруулна уу.
Хэрэглэгчид ёс зүйн дүрмийг мэдэж байхын тулд хэсэг бүрт тодорхой зааврыг байрлуулахыг зөвлөж байна. Эмнэлзүйн дээжинд ДНХ эсвэл РНХ-ийн маш бага түвшинг илрүүлдэг оношилгооны лабораториуд PCR-ийн өмнөх өрөөнд бага зэрэг эерэг агаарын даралттай, PCR-ийн дараах өрөөнд бага зэрэг сөрөг агаарын даралттай тусдаа агааржуулалтын системтэй байх нэмэлт аюулгүй байдлын арга хэмжээг авахыг хүсч болно.
Эцэст нь, чанарын баталгаажуулалтын (QA) төлөвлөгөө боловсруулах нь тустай. Ийм төлөвлөгөөнд урвалжийн мастер болон ажлын нөөцийн жагсаалт, иж бүрдэл болон урвалжийг хадгалах дүрэм, хяналтын үр дүнгийн тайлан, ажилтнуудын сургалтын хөтөлбөр, алдааг олж засварлах алгоритм, шаардлагатай үед засах арга хэмжээ багтсан байх ёстой.
6. Ном зүй
Аслан А, Кинзелман Ж, Дреелин Э, Ананьева Т, Лавандер Ж. 3-р бүлэг: qPCR лаборатори байгуулах. USEPA qPCR аргыг ашиглан амралт зугаалгын усыг турших удирдамжийн баримт бичиг 1611. Лансинг- Мичиганы Улсын Их Сургууль.
Английн Нийгмийн Эрүүл Мэндийн Алба, NHS. Микробиологийн судалгааны Их Британийн стандартууд: Молекулын олшруулалтын шинжилгээ хийх үеийн сайн лабораторийн практик). Чанарын удирдамж. 2013;4(4):1–15.
Миффлин Т. ПГУ-ын лаборатори байгуулах нь. Хүйтэн хаврын харб протокол. 2007;7.
Шредер С 2013. Центрифугийн тогтмол засвар үйлчилгээ: центрифуг, ротор болон адаптерийг цэвэрлэх, засвар үйлчилгээ хийх, ариутгах (Цагаан цаас №14). Гамбург: Эппендорф; 2013.
Виана Р.В., Уоллис К.Л. Оношилгооны лабораторид ашигладаг молекулд суурилсан шинжилгээнд зориулсан сайн клиник лабораторийн практик (GCLP), редактор Акяр И. Чанарын хяналтын өргөн хүрээ. Риека, Хорват: Intech; 2011: 29–52.
Нийтэлсэн цаг: 2020 оны 7-р сарын 16
