ສິ່ງທີ່ຄວນເຮັດ ແລະ ບໍ່ຄວນເຮັດ ສຳລັບການທົດສອບໂມເລກຸນ

ວິທີການກວດຫາໂມເລກຸນມີຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດກົດນິວເຄຼຍອິກໃນປະລິມານຫຼາຍໂດຍຜ່ານການຂະຫຍາຍປະລິມານທີ່ພົບໃນຕົວຢ່າງ. ໃນຂະນະທີ່ສິ່ງນີ້ເປັນປະໂຫຍດສຳລັບການເຮັດໃຫ້ການກວດຫາມີຄວາມອ່ອນໄຫວ, ມັນຍັງນຳສະເໜີຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນຜ່ານການແຜ່ລາມຂອງແອໂຣໂຊນຂະຫຍາຍໃນສະພາບແວດລ້ອມຂອງຫ້ອງທົດລອງ. ເມື່ອດຳເນີນການທົດລອງ, ສາມາດປະຕິບັດມາດຕະການເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງສານປະຕິກິລິຍາ, ອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ພື້ນທີ່ນັ່ງ, ເພາະວ່າການປົນເປື້ອນດັ່ງກ່າວອາດຈະສ້າງຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ (ຫຼື ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ).

ເພື່ອຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນ, ຄວນມີການປະຕິບັດການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີຢູ່ສະເໝີ. ໂດຍສະເພາະ, ຄວນມີມາດຕະການປ້ອງກັນກ່ຽວກັບຈຸດຕໍ່ໄປນີ້:

1. ການຈັດການສານປະຕິກິລິຍາ
2. ການຈັດຕັ້ງພື້ນທີ່ເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ
3. ຄຳແນະນຳກ່ຽວກັບການນຳໃຊ້ ແລະ ການທຳຄວາມສະອາດສຳລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກຳນົດໄວ້
4. ຄຳແນະນຳທົ່ວໄປກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ
5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ
6. ບັນນານຸກົມ

1. ການຈັດການສານປະຕິກິລິຍາ

ໃຫ້ປั่นທໍ່ນໍ້າຢາກ່ອນເປີດເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການເກີດຂອງສະເປຣ. ໃຫ້ແບ່ງນໍ້າຢາອອກເປັນຕ່ອນໆເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງ-ລະລາຍຫຼາຍຄັ້ງ ແລະ ການປົນເປື້ອນຂອງນໍ້າຢາຫຼັກ. ຕິດສະຫຼາກ ແລະ ລົງວັນທີຢ່າງຈະແຈ້ງກ່ຽວກັບນໍ້າຢາ ແລະ ທໍ່ປະຕິກິລິຍາທັງໝົດ ແລະ ຮັກສາບັນທຶກຂອງໝາຍເລກລ໋ອດນໍ້າຢາ ແລະ ໝາຍເລກກຸ່ມນໍ້າຢາທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງທັງໝົດ. ປິເປັດນໍ້າຢາ ແລະ ຕົວຢ່າງທັງໝົດໂດຍໃຊ້ປາຍກອງ. ກ່ອນທີ່ຈະຊື້, ຄວນຢືນຢັນກັບຜູ້ຜະລິດວ່າປາຍກອງເໝາະສົມກັບຍີ່ຫໍ້ຂອງປິເປັດທີ່ຈະໃຊ້.

2. ການຈັດຕັ້ງພື້ນທີ່ເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ

ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຄວນໄດ້ຮັບການຈັດຕັ້ງເພື່ອຮັບປະກັນວ່າການໄຫຼວຽນຂອງວຽກງານເກີດຂຶ້ນໃນທິດທາງດຽວ, ຈາກພື້ນທີ່ສະອາດ (ກ່ອນ PCR) ໄປຫາພື້ນທີ່ເປື້ອນ (ຫຼັງ PCR). ຂໍ້ຄວນລະວັງທົ່ວໄປຕໍ່ໄປນີ້ຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນໂອກາດຂອງການປົນເປື້ອນ. ມີຫ້ອງທີ່ກຳນົດໄວ້ແຍກຕ່າງຫາກ, ຫຼືຢ່າງໜ້ອຍກໍ່ແຍກພື້ນທີ່ທາງກາຍະພາບອອກຈາກກັນ, ສຳລັບ: ການກະກຽມ mastermix, ການສະກັດກົດນິວຄລີອິກ ແລະ ການເພີ່ມແມ່ແບບ DNA, ການຂະຫຍາຍ ແລະ ການຈັດການຜະລິດຕະພັນທີ່ຂະຫຍາຍ, ແລະ ການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ, ຕົວຢ່າງເຊັ່ນ gel electrophoresis.

ໃນບາງສະຖານະການ, ການມີຫ້ອງແຍກຕ່າງຫາກ 4 ຫ້ອງແມ່ນເປັນເລື່ອງຍາກ. ທາງເລືອກທີ່ເປັນໄປໄດ້ແຕ່ບໍ່ໜ້າປາຖະໜາຄືການກະກຽມ mastermix ໃນພື້ນທີ່ບັນຈຸ, ຕົວຢ່າງເຊັ່ນ ຕູ້ໄຫຼແບບລຽບ. ໃນກໍລະນີຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ຊ້ອນກັນ, ການກະກຽມ mastermix ສຳລັບປະຕິກິລິຍາຮອບທີສອງຄວນກະກຽມໃນພື້ນທີ່ 'ສະອາດ' ສຳລັບການກະກຽມ mastermix, ແຕ່ການສັກຢາດ້ວຍຜະລິດຕະພັນ PCR ຫຼັກຄວນເຮັດໃນຫ້ອງຂະຫຍາຍ, ແລະຖ້າເປັນໄປໄດ້ໃນພື້ນທີ່ບັນຈຸສະເພາະ (ເຊັ່ນ ຕູ້ໄຫຼແບບລຽບ).

ແຕ່ລະຫ້ອງ/ພື້ນທີ່ຕ້ອງການຊຸດປິເປັດ, ປາຍຕົວກອງ, ຊັ້ນວາງທໍ່, ເຄື່ອງປັ່ນນ້ຳ, ເຄື່ອງປั่นແຍກ (ຖ້າກ່ຽວຂ້ອງ), ປາກກາ, ນ້ຳຢາທົດລອງທົ່ວໄປ, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ກ່ອງຖົງມືທີ່ຈະຍັງຄົງຢູ່ສະຖານີເຮັດວຽກຂອງແຕ່ລະບ່ອນ. ຕ້ອງລ້າງມື ແລະ ປ່ຽນຖົງມື ແລະ ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງເມື່ອເຄື່ອນຍ້າຍລະຫວ່າງພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້. ບໍ່ຄວນຍ້າຍນ້ຳຢາ ແລະ ອຸປະກອນຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນໄປຫາພື້ນທີ່ສະອາດ. ຖ້າມີກໍລະນີຮ້າຍແຮງເກີດຂຶ້ນທີ່ນ້ຳຢາ ຫຼື ອຸປະກອນຕ້ອງຖືກຍ້າຍກັບຄືນ, ກ່ອນອື່ນໝົດຕ້ອງກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນດ້ວຍໂຊດຽມໄຮໂພຄລໍໄຣ 10%, ຈາກນັ້ນເຊັດດ້ວຍນ້ຳໝັນ.

ໝາຍເຫດ

ນ້ຳຢາໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ 10% ຕ້ອງໄດ້ປຸງແຕ່ງສົດທຸກໆມື້. ເມື່ອໃຊ້ສຳລັບການກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນ, ຄວນຍຶດໝັ້ນກັບເວລາສຳຜັດຢ່າງໜ້ອຍ 10 ນາທີ.
ອີກທາງເລືອກໜຶ່ງ, ຜະລິດຕະພັນທີ່ມີຢູ່ໃນທ້ອງຕະຫຼາດທີ່ໄດ້ຮັບການຢືນຢັນວ່າເປັນສານກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນພື້ນຜິວທີ່ທຳລາຍ DNA ສາມາດໃຊ້ໄດ້ ຖ້າຄຳແນະນຳດ້ານຄວາມປອດໄພໃນທ້ອງຖິ່ນບໍ່ອະນຸຍາດໃຫ້ໃຊ້ໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ ຫຼື ຖ້າໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣບໍ່ເໝາະສົມສຳລັບການກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນຊິ້ນສ່ວນໂລຫະຂອງອຸປະກອນ.

ໂດຍຫຼັກການແລ້ວ, ພະນັກງານຄວນປະຕິບັດຕາມຈັນຍາບັນການເຮັດວຽກແບບທິດທາງດຽວ ແລະ ບໍ່ຍ້າຍຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນ (ຫຼັງ PCR) ກັບຄືນໄປພື້ນທີ່ສະອາດ (ກ່ອນ PCR) ໃນມື້ດຽວກັນ. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ອາດຈະມີບາງໂອກາດທີ່ບໍ່ສາມາດຫຼີກລ່ຽງໄດ້. ເມື່ອເກີດເຫດການດັ່ງກ່າວ, ພະນັກງານຕ້ອງລ້າງມືໃຫ້ສະອາດ, ປ່ຽນຖົງມື, ໃຊ້ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງທີ່ກຳນົດໄວ້ ແລະ ບໍ່ນຳເອົາອຸປະກອນໃດໆທີ່ພວກເຂົາຕ້ອງການເອົາອອກຈາກຫ້ອງອີກ, ເຊັ່ນ: ປຶ້ມຫ້ອງທົດລອງ. ມາດຕະການຄວບຄຸມດັ່ງກ່າວຄວນໄດ້ຮັບການເນັ້ນໜັກໃນການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານກ່ຽວກັບວິທີການໂມເລກຸນ.

ຫຼັງຈາກການນຳໃຊ້, ພື້ນທີ່ນັ່ງຄວນເຮັດຄວາມສະອາດດ້ວຍໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ 10% (ຕາມດ້ວຍນ້ຳທີ່ຂ້າເຊື້ອເພື່ອກຳຈັດນ້ຳຢາຟອກຂາວທີ່ເຫຼືອ), ເອທານອນ 70%, ຫຼື ນ້ຳຢາຂ້າເຊື້ອ DNA ທີ່ໄດ້ຮັບການຮັບຮອງແລ້ວທີ່ມີຢູ່ໃນທ້ອງຕະຫຼາດ. ໂດຍຫຼັກການແລ້ວ, ຄວນຕິດຕັ້ງໂຄມໄຟອັລຕຣາໄວໂອເລັດ (UV) ເພື່ອໃຫ້ສາມາດກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນໂດຍການສ່ອງແສງ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການໃຊ້ໂຄມໄຟ UV ຄວນຖືກຈຳກັດຢູ່ໃນພື້ນທີ່ເຮັດວຽກທີ່ປິດ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ຄວາມປອດໄພ, ເພື່ອຈຳກັດການສຳຜັດກັບ UV ຂອງພະນັກງານຫ້ອງທົດລອງ. ກະລຸນາປະຕິບັດຕາມຄຳແນະນຳຂອງຜູ້ຜະລິດສຳລັບການດູແລໂຄມໄຟ UV, ການລະບາຍອາກາດ ແລະ ການທຳຄວາມສະອາດເພື່ອຮັບປະກັນວ່າໂຄມໄຟຍັງຄົງມີປະສິດທິພາບ.

ຖ້າໃຊ້ເອທານອນ 70% ແທນໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ, ຈະຕ້ອງໄດ້ສ່ອງແສງ UV ເພື່ອກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນໃຫ້ສຳເລັດ.
ຢ່າເຮັດຄວາມສະອາດເຄື່ອງປັ່ນນ້ຳวน ແລະ ເຄື່ອງປັ່ນແຍກດ້ວຍໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ; ແທນທີ່ຈະເຊັດດ້ວຍເອທານອນ 70% ແລະ ປ່ອຍໃຫ້ຖືກແສງ UV, ຫຼື ໃຊ້ນ້ຳຢາຂ້າເຊື້ອ DNA ທີ່ຂາຍຕາມທ້ອງຕະຫຼາດ. ສຳລັບການຮົ່ວໄຫຼ, ໃຫ້ກວດສອບກັບຜູ້ຜະລິດເພື່ອຂໍຄຳແນະນຳໃນການເຮັດຄວາມສະອາດເພີ່ມເຕີມ. ຖ້າຄຳແນະນຳຂອງຜູ້ຜະລິດອະນຸຍາດ, ປີເປັດຄວນໄດ້ຮັບການຂ້າເຊື້ອເປັນປະຈຳດ້ວຍເຄື່ອງອັດຄວາມຮ້ອນສູງ. ຖ້າປີເປັດບໍ່ສາມາດຖືກອັດຄວາມຮ້ອນສູງໄດ້, ມັນຄວນຈະພຽງພໍທີ່ຈະເຮັດຄວາມສະອາດພວກມັນດ້ວຍໂຊດຽມໄຮໂປຄລໍໄຣ 10% (ຕາມດ້ວຍການເຊັດຢ່າງລະອຽດດ້ວຍນ້ຳທີ່ຂ້າເຊື້ອ) ຫຼື ດ້ວຍນ້ຳຢາຂ້າເຊື້ອ DNA ທີ່ຂາຍຕາມທ້ອງຕະຫຼາດ ແລະ ໂດຍການສຳຜັດກັບແສງ UV.

ການທຳຄວາມສະອາດດ້ວຍໂຊດຽມໄຮໂພຄລໍໄຣດ໌ໃນອັດຕາສ່ວນສູງອາດຈະທຳລາຍພາດສະຕິກ ແລະ ໂລຫະຂອງປິເປັດໄດ້ ຖ້າເຮັດເປັນປະຈຳ; ໃຫ້ກວດສອບຄຳແນະນຳຈາກຜູ້ຜະລິດກ່ອນ. ອຸປະກອນທັງໝົດຕ້ອງໄດ້ຮັບການວັດແທກເປັນປະຈຳຕາມຕາຕະລາງເວລາທີ່ຜູ້ຜະລິດແນະນຳ. ບຸກຄົນທີ່ໄດ້ຮັບມອບໝາຍຄວນຮັບຜິດຊອບໃນການຮັບປະກັນວ່າຕາຕະລາງການວັດແທກໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມ, ບັນທຶກລະອຽດຖືກຮັກສາໄວ້, ແລະ ປ້າຍບໍລິການຖືກສະແດງຢ່າງຊັດເຈນຢູ່ໃນອຸປະກອນ.

3. ຄຳແນະນຳກ່ຽວກັບການນຳໃຊ້ ແລະ ການທຳຄວາມສະອາດສຳລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກຳນົດໄວ້

Pre-PCR: ການກະກຽມສ່ວນປະກອບຂອງສານລະລາຍ / ການກະກຽມ mastermix: ນີ້ຄວນເປັນພື້ນທີ່ທີ່ສະອາດທີ່ສຸດໃນບັນດາພື້ນທີ່ທັງໝົດທີ່ໃຊ້ສຳລັບການກະກຽມການທົດລອງໂມເລກຸນ ແລະ ຄວນເປັນຕູ້ໄຫຼແບບລາມິນາທີ່ມີແສງ UV. ຕົວຢ່າງ, ກົດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກມາ ແລະ ຜະລິດຕະພັນ PCR ທີ່ຖືກຂະຫຍາຍຕ້ອງບໍ່ຖືກຈັດການໃນພື້ນທີ່ນີ້. ສານລະລາຍທີ່ຂະຫຍາຍຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຕູ້ແຊ່ແຂງ (ຫຼື ຕູ້ເຢັນ, ຕາມຄຳແນະນຳຂອງຜູ້ຜະລິດ) ໃນພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້ດຽວກັນ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນຢູ່ຂ້າງຕູ້ໄຫຼແບບລາມິນາ ຫຼື ພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR. ຄວນປ່ຽນຖົງມືທຸກຄັ້ງເມື່ອເຂົ້າໄປໃນພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR ຫຼື ຕູ້ໄຫຼແບບລາມິນາ.

ບໍລິເວນກ່ອນ PCR ຫຼື ຕູ້ໄຫຼແບບລຽບຄວນໄດ້ຮັບການທຳຄວາມສະອາດກ່ອນ ແລະ ຫຼັງການນຳໃຊ້ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ເຊັດທຸກສິ່ງຂອງໃນຕູ້, ເຊັ່ນ: ປີເປັດ, ກ່ອງປາຍ, ນ້ຳວົນ, ເຄື່ອງປั่นແຍກ, ຊັ້ນວາງທໍ່, ປາກກາ, ແລະອື່ນໆ ດ້ວຍເອທານອນ 70% ຫຼື ນ້ຳຢາຂ້າເຊື້ອ DNA ທີ່ຂາຍທາງການຄ້າ, ແລະ ປະໃຫ້ແຫ້ງ. ໃນກໍລະນີຂອງພື້ນທີ່ເຮັດວຽກທີ່ປິດ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ໄຫຼແບບລຽບ, ໃຫ້ເອົາຝາປິດໄປຕາກແດດເປັນເວລາ 30 ນາທີ.

ໝາຍເຫດ

ຢ່າໃຫ້ສານປະຕິກິລິຍາຖືກແສງ UV; ຍ້າຍພວກມັນເຂົ້າໄປໃນຕູ້ເມື່ອມັນສະອາດແລ້ວເທົ່ານັ້ນ. ຖ້າປະຕິບັດ PCR ການຖອດລະຫັດແບບປີ້ນກັບກັນ, ມັນອາດຈະເປັນປະໂຫຍດທີ່ຈະເຊັດພື້ນຜິວ ແລະ ອຸປະກອນດ້ວຍນໍ້າຢາທີ່ທຳລາຍ RNases ເມື່ອສຳຜັດ. ສິ່ງນີ້ອາດຈະຊ່ວຍຫຼີກເວັ້ນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຈາກການເສື່ອມສະພາບຂອງ RNA ຂອງ enzyme. ຫຼັງຈາກການຂ້າເຊື້ອ ແລະ ກ່ອນທີ່ຈະກະກຽມ mastermix, ຄວນປ່ຽນຖົງມືອີກຄັ້ງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຕູ້ກໍພ້ອມທີ່ຈະໃຊ້.

Pre-PCR: ການສະກັດກົດນິວຄລີອິກ/ການເພີ່ມແມ່ແບບ:

ກົດນິວຄລີອິກຕ້ອງໄດ້ຮັບການສະກັດ ແລະ ຈັດການໃນພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້ທີສອງ, ໂດຍໃຊ້ຊຸດປິເປັດ, ປາຍກອງ, ຊັ້ນວາງທໍ່, ຖົງມືໃໝ່, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ອຸປະກອນອື່ນໆແຍກຕ່າງຫາກ. ພື້ນທີ່ນີ້ຍັງແມ່ນສຳລັບການເພີ່ມແມ່ແບບ, ຕົວຄວບຄຸມ ແລະ ເສັ້ນແນວໂນ້ມໃສ່ທໍ່ ຫຼື ແຜ່ນມາສເຕີມິກ. ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງກົດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກມາທີ່ກຳລັງຖືກວິເຄາະ, ແນະນຳໃຫ້ປ່ຽນຖົງມືກ່ອນທີ່ຈະຈັດການການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ ຫຼື ມາດຕະຖານ ແລະ ໃຊ້ຊຸດປິເປັດແຍກຕ່າງຫາກ. ສານເຄມີ PCR ແລະ ຜະລິດຕະພັນທີ່ຂະຫຍາຍແລ້ວຕ້ອງບໍ່ຖືກປິເປັດໃນພື້ນທີ່ນີ້. ຕົວຢ່າງຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນ ຫຼື ຕູ້ແຊ່ແຂງທີ່ກຳນົດໄວ້ໃນພື້ນທີ່ດຽວກັນ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຂອງຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການທຳຄວາມສະອາດໃນລັກສະນະດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ມາສເຕີມິກ.

ຫຼັງ PCR: ການຂະຫຍາຍ ແລະ ການຈັດການຜະລິດຕະພັນທີ່ຂະຫຍາຍແລ້ວ

ພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້ນີ້ແມ່ນສຳລັບຂະບວນການຫຼັງການຂະຫຍາຍ ແລະ ຄວນແຍກອອກຈາກພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR. ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວມັນປະກອບດ້ວຍເຄື່ອງວັດອຸນຫະພູມ ແລະ ແພລດຟອມເວລາຈິງ, ແລະ ຄວນມີຕູ້ໄຫຼແບບລຽບງ່າຍ ສຳລັບເພີ່ມຜະລິດຕະພັນ PCR ຮອບທີ 1 ໃສ່ປະຕິກິລິຍາຮອບທີ 2, ຖ້າ PCR ທີ່ຊ້ອນກັນກຳລັງຖືກປະຕິບັດ. ສານເຄມີ PCR ແລະ ກົດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກມາຕ້ອງບໍ່ຖືກຈັດການໃນພື້ນທີ່ນີ້ ເນື່ອງຈາກຄວາມສ່ຽງຂອງການປົນເປື້ອນແມ່ນສູງ. ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນມີຊຸດຖົງມື, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແຜ່ນ ແລະ ທໍ່, ປີເປັດ, ປາຍຕົວກອງ, ຖັງ ແລະ ອຸປະກອນອື່ນໆແຍກຕ່າງຫາກ. ທໍ່ຕ້ອງໄດ້ຮັບການປั่นແຍກກ່ອນເປີດ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການທຳຄວາມສະອາດໃນລັກສະນະດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.

ຫຼັງ PCR: ການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ

ຫ້ອງນີ້ແມ່ນສຳລັບອຸປະກອນກວດຈັບຜະລິດຕະພັນ, ເຊັ່ນ: ຖັງເຈວເອເລັກໂຕຣໂຟເຣຊິສ, ຊຸດໄຟຟ້າ, ເຄື່ອງສ່ອງແສງ UV ແລະ ລະບົບເອກະສານເຈວ. ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນມີຊຸດຖົງມືແຍກຕ່າງຫາກ, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແຜ່ນ ແລະ ທໍ່, ປີເປັດ, ປາຍຕົວກອງ, ຖັງ ແລະ ອຸປະກອນອື່ນໆ. ຫ້າມນຳເອົາສານປະຕິກິລິຍາອື່ນໆເຂົ້າມາໃນພື້ນທີ່ນີ້, ຍົກເວັ້ນສີຍ້ອມ, ຕົວຊີ້ວັດໂມເລກຸນ ແລະ ເຈວອາກາໂຣສ, ແລະ ສ່ວນປະກອບບັຟເຟີ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຂອງຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການທຳຄວາມສະອາດໃນລັກສະນະດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ປະສົມຫຼັກ.

ໝາຍເຫດສຳຄັນ

ໂດຍຫຼັກການແລ້ວ, ຫ້ອງກ່ອນ PCR ບໍ່ຄວນເຂົ້າໃນມື້ດຽວກັນ ຖ້າວຽກງານໄດ້ປະຕິບັດແລ້ວໃນຫ້ອງຫຼັງ PCR. ຖ້າສິ່ງນີ້ບໍ່ສາມາດຫຼີກລ່ຽງໄດ້ຢ່າງສິ້ນເຊີງ, ໃຫ້ຮັບປະກັນວ່າມືໄດ້ຖືກລ້າງໃຫ້ສະອາດກ່ອນ ແລະ ໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງສະເພາະໃນຫ້ອງ. ປື້ມຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ເອກະສານຕ່າງໆ ບໍ່ຕ້ອງຖືກນຳເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ຖ້າພວກມັນໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ໃນຫ້ອງຫຼັງ PCR; ຖ້າຈຳເປັນ, ໃຫ້ພິມສຳເນົາຂອງໂປໂຕຄອນ/ຕົວຢ່າງ ID, ແລະອື່ນໆ.

4. ຄຳແນະນຳທົ່ວໄປກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ

ໃຊ້ຖົງມືທີ່ບໍ່ມີແປ້ງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຍັບຍັ້ງການທົດສອບ. ເຕັກນິກການປິເຕັດທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນທີ່ສຸດໃນການຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນ. ການປິເຕັດທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການກະຈາຍເມື່ອແຈກຢາຍຂອງແຫຼວ ແລະ ການສ້າງສະເປຣ. ວິທີປະຕິບັດທີ່ດີສຳລັບການປິເຕັດທີ່ຖືກຕ້ອງສາມາດພົບໄດ້ທີ່ລິ້ງຕໍ່ໄປນີ້: ຄູ່ມື Gilson ກ່ຽວກັບການປິເຕັດ, ວິດີໂອເຕັກນິກການປິເຕັດ Anachem, ທໍ່ centrifuge ກ່ອນເປີດ, ແລະ ເປີດພວກມັນຢ່າງລະມັດລະວັງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການກະຈາຍ. ປິດທໍ່ທັນທີຫຼັງຈາກການນຳໃຊ້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການນຳເອົາສິ່ງປົນເປື້ອນເຂົ້າມາ.

ເມື່ອປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາຫຼາຍຢ່າງ, ໃຫ້ກະກຽມ mastermix ໜຶ່ງອັນທີ່ມີຕົວເຮັດປະຕິກິລິຍາທົ່ວໄປ (ເຊັ່ນ: ນ້ຳ, dNTPs, ບັຟເຟີ, ໄພຣເມີ ແລະ ເອນໄຊມ໌) ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຈຳນວນການໂອນຕົວເຮັດປະຕິກິລິຍາ ແລະ ຫຼຸດຜ່ອນໄພຂົ່ມຂູ່ຂອງການປົນເປື້ອນ. ແນະນຳໃຫ້ຕັ້ງ mastermix ໃສ່ນ້ຳກ້ອນ ຫຼື ບລັອກເຢັນ. ການໃຊ້ເອນໄຊມ໌ Hot Start ອາດຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການຜະລິດຜະລິດຕະພັນທີ່ບໍ່ສະເພາະເຈາະຈົງ. ປົກປ້ອງຕົວເຮັດປະຕິກິລິຍາທີ່ມີໂພຣບ fluorescent ຈາກແສງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການເສື່ອມສະພາບ.

5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ

ລວມເອົາການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ ແລະ ທາງລົບທີ່ມີລັກສະນະດີ, ຢືນຢັນແລ້ວ, ພ້ອມກັບການຄວບຄຸມທີ່ບໍ່ມີແມ່ແບບໃນທຸກໆປະຕິກິລິຍາ, ແລະເສັ້ນແນວໂນ້ມທີ່ມີການປັບລະດັບຫຼາຍຈຸດສຳລັບປະຕິກິລິຍາດ້ານປະລິມານ. ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກບໍ່ຄວນແຂງແຮງເກີນໄປຈົນມີຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ. ລວມເອົາການຄວບຄຸມການສະກັດເອົາທັງໃນທາງບວກ ແລະ ທາງລົບເມື່ອປະຕິບັດການສະກັດເອົາກົດນິວເຄຼຍອິກ.

ແນະນຳໃຫ້ຕິດຄຳແນະນຳທີ່ຊັດເຈນໄວ້ໃນແຕ່ລະພື້ນທີ່ ເພື່ອໃຫ້ຜູ້ໃຊ້ຮູ້ເຖິງກົດລະບຽບການປະພຶດ. ຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສທີ່ກວດພົບລະດັບ DNA ຫຼື RNA ຕ່ຳຫຼາຍໃນຕົວຢ່າງທາງຄລີນິກອາດຈະຕ້ອງການໃຊ້ມາດຕະການຄວາມປອດໄພເພີ່ມເຕີມໂດຍການມີລະບົບການຈັດການອາກາດແຍກຕ່າງຫາກທີ່ມີຄວາມດັນອາກາດບວກເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ແລະ ຄວາມດັນອາກາດລົບເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງຫຼັງ PCR.

ສຸດທ້າຍ, ການພັດທະນາແຜນການຮັບປະກັນຄຸນນະພາບ (QA) ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດ. ແຜນການດັ່ງກ່າວຄວນປະກອບມີລາຍຊື່ຂອງສະຕັອກນ້ຳຢາຫຼັກ ແລະ ສະຕັອກນ້ຳຢາເຮັດວຽກ, ກົດລະບຽບສຳລັບການເກັບຮັກສາຊຸດ ແລະ ນ້ຳຢາ, ການລາຍງານຜົນການຄວບຄຸມ, ໂຄງການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານ, ຂັ້ນຕອນວິທີການແກ້ໄຂບັນຫາ, ແລະ ການແກ້ໄຂເມື່ອຈຳເປັນ.

6. ບັນນານຸກົມ

Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. ບົດທີ 3: ການສ້າງຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ qPCR. ເອກະສານແນະນຳສຳລັບການທົດສອບນ້ຳເພື່ອການພັກຜ່ອນໂດຍໃຊ້ວິທີ USEPA qPCR 1611. Lansing - ມະຫາວິທະຍາໄລລັດ Michigan.

ສາທາລະນະສຸກອັງກິດ, NHS. ມາດຕະຖານຂອງສະຫະລາຊະອານາຈັກສຳລັບການສືບສວນດ້ານຈຸລິນຊີວິທະຍາ: ການປະຕິບັດໃນຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີເມື່ອປະຕິບັດການວິເຄາະການຂະຫຍາຍໂມເລກຸນ). ຄຳແນະນຳດ້ານຄຸນນະພາບ. 2013;4(4):1–15.

Mifflin T. ການສ້າງຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ PCR. ອະນຸສັນຍາ Cold Spring Harb. 2007;7.

Schroeder S 2013. ການບຳລຸງຮັກສາເຄື່ອງປั่นແຍກເປັນປະຈຳ: ການທຳຄວາມສະອາດ, ການບຳລຸງຮັກສາ ແລະ ການຂ້າເຊື້ອເຄື່ອງປั่นແຍກ, ໂລເຕີ ແລະ ຕົວປັບ (ເອກະສານຂາວ ສະບັບເລກທີ 14). Hamburg: Eppendorf; 2013.

Viana RV, Wallis CL. ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທາງດ້ານຄລີນິກທີ່ດີ (GCLP) ສຳລັບການທົດສອບໂດຍອີງໃສ່ໂມເລກຸນທີ່ໃຊ້ໃນຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສ, ໃນ: Akyar I, ບັນນາທິການ. ສະເປກຕຣຳທີ່ກວ້າງຂວາງຂອງການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ. Rijeka, ໂຄຣເອເຊຍ: Intech; 2011: 29–52.