မော်လီကျူးစမ်းသပ်မှုအတွက် လုပ်သင့်သည်များနှင့် မလုပ်သင့်သည်များ

မော်လီကျူး ထောက်လှမ်းခြင်း နည်းလမ်းများသည် နမူနာများတွင် တွေ့ရှိရသော သဲလွန်စပမာဏများကို တိုးမြှင့်ခြင်းဖြင့် နျူကလစ်အက်ဆစ် ပမာဏများစွာကို ထုတ်လုပ်နိုင်စွမ်းရှိသည်။ ၎င်းသည် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို မြှင့်တင်ပေးရန်အတွက် အကျိုးရှိသော်လည်း ဓာတ်ခွဲခန်းပတ်ဝန်းကျင်တွင် ချဲ့ထွင်မှု aerosol များ ပျံ့နှံ့ခြင်းဖြင့် ညစ်ညမ်းမှုဖြစ်နိုင်ခြေကိုလည်း မိတ်ဆက်ပေးသည်။ စမ်းသပ်မှုများ ပြုလုပ်သည့်အခါ reagents၊ ဓာတ်ခွဲခန်းပစ္စည်းကိရိယာများနှင့် ခုံတန်းလျားများ ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ရှားရန် အစီအမံများ ပြုလုပ်နိုင်သည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ထိုကဲ့သို့သော ညစ်ညမ်းမှုသည် မှားယွင်းသော-အပြုသဘောဆောင်သော (သို့မဟုတ် မှားယွင်းသော-အနုတ်လက္ခဏာ) ရလဒ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။

ညစ်ညမ်းမှုဖြစ်နိုင်ခြေကို လျှော့ချရန်အတွက် ကောင်းမွန်သောဓာတ်ခွဲခန်းဆိုင်ရာအလေ့အကျင့်ကို အချိန်တိုင်းကျင့်သုံးသင့်သည်။ အထူးသဖြင့် အောက်ပါအချက်များနှင့်ပတ်သက်၍ ကြိုတင်ကာကွယ်မှုများ ပြုလုပ်သင့်သည်။

၁။ ဓါတ်ကူပစ္စည်းများကို ကိုင်တွယ်ခြင်း
၂။ အလုပ်ခွင်နှင့် ပစ္စည်းကိရိယာများ စီစဉ်ခြင်း
၃။ သတ်မှတ်ထားသော မော်လီကျူးနေရာအတွက် အသုံးပြုမှုနှင့် သန့်ရှင်းရေးဆိုင်ရာ အကြံဉာဏ်များ
၄။ အထွေထွေ မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ အကြံဉာဏ်
၅။ အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုများ
၆။ စာစုစာရင်း

၁။ ဓါတ်ကူပစ္စည်းများကို ကိုင်တွယ်ခြင်း

aerosol များဖြစ်ပေါ်ခြင်းကို ရှောင်ရှားရန် reagent ပြွန်များကို မဖွင့်မီ ခေတ္တ centrifuge လုပ်ပါ။ freeze-thaw အများအပြားနှင့် master stock များညစ်ညမ်းခြင်းကို ရှောင်ရှားရန် reagents များကို ခွဲဝေထည့်ပါ။ reagent နှင့် reaction ပြွန်အားလုံးကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်း တံဆိပ်ကပ်ပြီး ရက်စွဲတပ်ပါ၊ စမ်းသပ်မှုအားလုံးတွင် အသုံးပြုသော reagent lot နှင့် batch နံပါတ်များ၏ မှတ်တမ်းများကို သိမ်းဆည်းထားပါ။ filter tips များကို အသုံးပြု၍ reagents နှင့် နမူနာအားလုံးကို pipette တွင်ထည့်ပါ။ ဝယ်ယူခြင်းမပြုမီ၊ အသုံးပြုမည့် pipette အမှတ်တံဆိပ်နှင့် filter tips များ ကိုက်ညီမှုရှိမရှိ ထုတ်လုပ်သူနှင့် အတည်ပြုရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။

၂။ အလုပ်ခွင်နှင့် ပစ္စည်းကိရိယာများ စီစဉ်ခြင်း

သန့်ရှင်းသောနေရာများ (PCR မလုပ်မီ) မှ ညစ်ပတ်သောနေရာများ (PCR လုပ်ပြီးနောက်) သို့ အလုပ်စီးဆင်းမှုသည် တစ်ဖက်သို့ ဦးတည်ကြောင်း သေချာစေရန် အလုပ်ခွင်ကို စီစဉ်သင့်သည်။ အောက်ပါ အထွေထွေကြိုတင်ကာကွယ်မှုများသည် ညစ်ညမ်းမှုဖြစ်နိုင်ခြေကို လျှော့ချရန် ကူညီပေးပါလိမ့်မည်။ သီးခြားသတ်မှတ်ထားသော အခန်းများ သို့မဟုတ် အနည်းဆုံး ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ သီးခြားနေရာများ ရှိပါ- mastermix ပြင်ဆင်ခြင်း၊ nucleic acid ထုတ်ယူခြင်းနှင့် DNA template ထည့်သွင်းခြင်း၊ ချဲ့ထွင်ထားသော ထုတ်ကုန်ကို ချဲ့ထွင်ခြင်းနှင့် ကိုင်တွယ်ခြင်း၊ နှင့် ထုတ်ကုန်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ ဥပမာ gel electrophoresis။

အချို့သောနေရာများတွင် သီးခြားအခန်း ၄ ခန်းထားရှိခြင်းသည် ခက်ခဲပါသည်။ ဖြစ်နိုင်သော်လည်း မလိုလားအပ်သော ရွေးချယ်မှုတစ်ခုမှာ mastermix ပြင်ဆင်မှုကို ထိန်းထားရန်နေရာတစ်ခုတွင် ပြုလုပ်ခြင်းဖြစ်သည်၊ ဥပမာ laminar flow cabinet။ nested PCR amplification တွင်၊ ဒုတိယအကျော့တုံ့ပြန်မှုအတွက် mastermix ပြင်ဆင်မှုကို mastermix ပြင်ဆင်မှုအတွက် 'သန့်ရှင်းသော' နေရာတွင် ပြင်ဆင်သင့်သော်လည်း primary PCR ထုတ်ကုန်ဖြင့် ထိုးနှံခြင်းကို amplification room တွင် ပြုလုပ်သင့်ပြီး ဖြစ်နိုင်ပါက သီးသန့်ထိန်းထားရန်နေရာ (ဥပမာ laminar flow cabinet) တွင် ပြုလုပ်သင့်သည်။

အခန်း/ဧရိယာတစ်ခုစီတွင် ရှင်းလင်းစွာတံဆိပ်တပ်ထားသော ပိုက်ပက်၊ စစ်ထုတ်ကိရိယာထိပ်ဖျားများ၊ ပြွန်စင်များ၊ vortexes များ၊ centrifuges (သက်ဆိုင်ပါက)၊ ဘောပင်များ၊ generic ဓာတ်ခွဲခန်း reagents များ၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများနှင့် လက်အိတ်ဘူးများ သီးခြားစီ လိုအပ်ပြီး ၎င်းတို့သည် ၎င်းတို့၏ သက်ဆိုင်ရာအလုပ်စခန်းများတွင် ရှိနေမည်ဖြစ်သည်။ သတ်မှတ်ထားသောနေရာများအကြား ရွေ့လျားသည့်အခါ လက်ကိုဆေးကြောပြီး လက်အိတ်များနှင့် ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများကို လဲလှယ်ရမည်။ reagents များနှင့် ပစ္စည်းကိရိယာများကို ညစ်ပတ်သောနေရာမှ သန့်ရှင်းသောနေရာသို့ မရွှေ့ပြောင်းသင့်ပါ။ reagents သို့မဟုတ် ပစ္စည်းကိရိယာတစ်ခုကို နောက်ပြန်ရွှေ့ရန် လိုအပ်သည့် ပြင်းထန်သောအခြေအနေတစ်ခု ပေါ်ပေါက်လာပါက ၎င်းကို ဦးစွာ ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက် ၁၀% ဖြင့် သန့်စင်ပြီးနောက် ပိုးသတ်ထားသောရေဖြင့် သုတ်ရမည်။

မှတ်ချက်

၁၀% ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက် ပျော်ရည်ကို နေ့စဉ် အသစ်ဖျော်စပ်ရမည်။ အညစ်အကြေး သန့်စင်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့်အခါ အနည်းဆုံး ၁၀ မိနစ် ထိတွေ့ချိန်ကို လိုက်နာရမည်။
တနည်းအားဖြင့် DNA ဖျက်ဆီးသည့် မျက်နှာပြင် သန့်စင်ပစ္စည်းများအဖြစ် အတည်ပြုထားသော စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော ထုတ်ကုန်များကို ဒေသဆိုင်ရာ ဘေးကင်းရေး အကြံပြုချက်များက ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက်ကို အသုံးပြုခွင့်မပြုပါက သို့မဟုတ် ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက်သည် စက်ပစ္စည်းများ၏ သတ္တုအစိတ်အပိုင်းများကို သန့်စင်ရန် မသင့်တော်ပါက အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။

အကောင်းဆုံးကတော့ ဝန်ထမ်းတွေဟာ တစ်လမ်းသွား လုပ်ငန်းစီးဆင်းမှု စံနှုန်းကို လိုက်နာသင့်ပြီး ညစ်ပတ်တဲ့နေရာတွေ (PCR ပြီးနောက်) ကနေ သန့်ရှင်းတဲ့နေရာတွေ (PCR မတိုင်ခင်) ကို အဲဒီနေ့မှာပဲ ပြန်မသွားသင့်ပါဘူး။ ဒါပေမယ့် ဒီလိုမလွှဲမရှောင်သာဖြစ်တဲ့အခါတွေ ရှိနိုင်ပါတယ်။ အဲဒီလိုအခြေအနေမျိုး ပေါ်ပေါက်လာတဲ့အခါ ဝန်ထမ်းတွေဟာ လက်ကို သေချာဆေးကြောဖို့၊ လက်အိတ်လဲလှယ်ဖို့၊ သတ်မှတ်ထားတဲ့ ဓာတ်ခွဲခန်းဝတ်စုံကို ဝတ်ဆင်ဖို့နဲ့ ဓာတ်ခွဲခန်းစာအုပ်တွေလိုမျိုး အခန်းထဲကနေ ပြန်ယူသွားချင်တဲ့ ပစ္စည်းကိရိယာတွေကို မထည့်သွင်းဖို့ ဂရုစိုက်ရပါမယ်။ မော်လီကျူးနည်းလမ်းတွေအကြောင်း ဝန်ထမ်းလေ့ကျင့်ရေးမှာ ဒီလိုထိန်းချုပ်မှု အစီအမံတွေကို အလေးပေးသင့်ပါတယ်။

အသုံးပြုပြီးနောက်၊ ခုံတန်းများကို ၁၀% ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက် (ကျန်နေသော ကလိုရင်းကို ဖယ်ရှားရန် ပိုးသတ်ထားသောရေဖြင့် ဆေးကြောပြီးနောက်)၊ ၇၀% အီသနော သို့မဟုတ် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော DNA ဖျက်ဆီးသည့် သန့်စင်ဆေးဖြင့် သန့်ရှင်းရေးလုပ်သင့်သည်။ အကောင်းဆုံးကတော့၊ ရောင်ခြည်ဖြင့် သန့်စင်နိုင်စေရန်အတွက် ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည် (UV) မီးချောင်းများကို တပ်ဆင်သင့်သည်။ သို့သော်၊ ဓာတ်ခွဲခန်းဝန်ထမ်းများ၏ ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်ထိတွေ့မှုကို ကန့်သတ်ရန်အတွက် UV မီးချောင်းများကို ပိတ်ထားသော အလုပ်ခွင်နေရာများ၊ ဥပမာ ဘေးကင်းရေးဗီဒိုများတွင်သာ အသုံးပြုသင့်သည်။ မီးချောင်းများ ထိရောက်မှုရှိစေရန်အတွက် UV မီးချောင်းထိန်းသိမ်းမှု၊ လေဝင်လေထွက်နှင့် သန့်ရှင်းရေးအတွက် ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်များကို လိုက်နာပါ။

ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက် အစား အီသနော ၇၀% ကို အသုံးပြုပါက ညစ်ညမ်းမှု သန့်စင်ခြင်းကို အပြီးသတ်ရန်အတွက် ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်ဖြင့် ထိတွေ့ရန် လိုအပ်ပါသည်။
vortex နှင့် centrifuge ကို ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက်ဖြင့် မသန့်ရှင်းပါနှင့်။ ယင်းအစား အီသနော ၇၀% ဖြင့် သုတ်ပြီး UV အလင်းရောင်တွင် ထားနိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် စီးပွားဖြစ် DNA ဖျက်ဆီးသည့် အညစ်အကြေးသန့်စင်ဆေးကို အသုံးပြုနိုင်သည်။ ယိုဖိတ်မှုများအတွက် နောက်ထပ်သန့်ရှင်းရေး အကြံဉာဏ်များအတွက် ထုတ်လုပ်သူနှင့် တိုင်ပင်ပါ။ ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်များက ခွင့်ပြုပါက pipettes များကို autoclave ဖြင့် ပုံမှန်ပိုးသတ်သင့်သည်။ pipettes များကို autoclave မလုပ်နိုင်ပါက ၎င်းတို့ကို ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက် ၁၀% ဖြင့် သန့်ရှင်းရေးလုပ်ပါ (ထို့နောက် ပိုးသတ်ထားသောရေဖြင့် သေချာစွာ သုတ်ပါ) သို့မဟုတ် စီးပွားဖြစ် DNA ဖျက်ဆီးသည့် အညစ်အကြေးသန့်စင်ဆေးဖြင့် UV ဖြင့် သန့်ရှင်းရေးလုပ်ပြီးနောက် လုံလောက်ပါသည်။

ရာခိုင်နှုန်းမြင့်မားသော ဆိုဒီယမ် ဟိုက်ပိုကလိုရိုက်ဖြင့် သန့်ရှင်းရေးလုပ်ခြင်းသည် ပုံမှန်ပြုလုပ်ပါက ပိုက်ပက်ပလတ်စတစ်နှင့် သတ္တုများကို ပျက်စီးစေနိုင်သည်။ ထုတ်လုပ်သူ၏ အကြံပြုချက်များကို ဦးစွာစစ်ဆေးပါ။ ထုတ်လုပ်သူ၏ အကြံပြုထားသော အချိန်ဇယားအတိုင်း ပစ္စည်းကိရိယာအားလုံးကို ပုံမှန်ချိန်ညှိရန် လိုအပ်သည်။ ချိန်ညှိမှုအချိန်ဇယားကို လိုက်နာကြောင်း၊ အသေးစိတ်မှတ်တမ်းများကို ထိန်းသိမ်းထားကြောင်းနှင့် ဝန်ဆောင်မှုတံဆိပ်များကို ပစ္စည်းကိရိယာများပေါ်တွင် ရှင်းရှင်းလင်းလင်းပြသထားကြောင်း သေချာစေရန် သတ်မှတ်ထားသော ပုဂ္ဂိုလ်တစ်ဦးမှ တာဝန်ယူသင့်သည်။

၃။ သတ်မှတ်ထားသော မော်လီကျူးနေရာအတွက် အသုံးပြုမှုနှင့် သန့်ရှင်းရေးဆိုင်ရာ အကြံဉာဏ်များ

Pre-PCR: ဓာတုပစ္စည်း aliquoting / mastermix ပြင်ဆင်မှု- ၎င်းသည် မော်လီကျူးစမ်းသပ်မှုများပြင်ဆင်ရန်အသုံးပြုသော နေရာအားလုံးတွင် အသန့်ရှင်းဆုံးဖြစ်သင့်ပြီး UV မီးတပ်ဆင်ထားသော သတ်မှတ်ထားသော laminar flow cabinet ဖြစ်သင့်သည်။ နမူနာများ၊ ထုတ်ယူထားသော nucleic acid နှင့် amplified PCR ထုတ်ကုန်များကို ဤနေရာတွင် ကိုင်တွယ်ခြင်းမပြုရပါ။ Amplification reagents များကို ရေခဲသေတ္တာ (သို့မဟုတ် ထုတ်လုပ်သူ၏ အကြံပြုချက်များအရ ရေခဲသေတ္တာ) တွင် သတ်မှတ်ထားသော နေရာတွင် laminar flow cabinet သို့မဟုတ် pre-PCR ဧရိယာဘေးတွင် သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။ pre-PCR ဧရိယာ သို့မဟုတ် laminar flow cabinet သို့ ဝင်ရောက်တိုင်း လက်အိတ်များကို လဲလှယ်သင့်သည်။

PCR ကြိုတင်အသုံးပြုသည့်နေရာ သို့မဟုတ် laminar flow cabinet ကို အသုံးမပြုမီနှင့် အသုံးမပြုပြီးနောက် အောက်ပါအတိုင်း သန့်ရှင်းရေးလုပ်သင့်သည်- cabinet အတွင်းရှိ ပစ္စည်းအားလုံးကို အီသနော ၇၀% သို့မဟုတ် စီးပွားဖြစ် DNA ဖျက်ဆီးသည့် အညစ်အကြေးသန့်စင်ဆေးဖြင့် သုတ်ပြီး ခြောက်သွေ့အောင်ထားပါ။ ပိတ်ထားသော အလုပ်လုပ်သည့်နေရာ၊ ဥပမာ laminar flow cabinet တွင် အဖုံးကို UV အလင်းရောင်ဖြင့် မိနစ် ၃၀ ကြာ ထားပါ။

မှတ်ချက်

ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်နှင့် ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကို မထိတွေ့စေပါနှင့်။ သန့်ရှင်းသွားသည်နှင့်သာ ဗီရိုထဲသို့ ရွှေ့ပြောင်းပါ။ reverse transcription PCR ကို လုပ်ဆောင်ပါက RNases များကို ထိတွေ့မှုတွင် ပြိုကွဲစေသည့် အရည်ဖြင့် မျက်နှာပြင်များနှင့် ပစ္စည်းကိရိယာများကို သုတ်ခြင်းသည်လည်း အထောက်အကူဖြစ်စေနိုင်ပါသည်။ ၎င်းသည် RNA ၏ အင်ဇိုင်းပြိုကွဲခြင်းကြောင့် မှားယွင်းသော အနုတ်လက္ခဏာရလဒ်များကို ရှောင်ရှားရန် ကူညီပေးနိုင်ပါသည်။ ညစ်ညမ်းမှု သန့်စင်ပြီးနောက်နှင့် mastermix ကို မပြင်ဆင်မီ လက်အိတ်များကို ထပ်မံလဲလှယ်သင့်ပြီး ထို့နောက် ဗီရိုကို အသုံးပြုရန် အဆင်သင့်ဖြစ်ပါပြီ။

PCR အကြို- နျူကလီအက်ဆစ် ထုတ်ယူခြင်း/ပုံစံထည့်သွင်းခြင်း-

နျူကလီးအစ်အက်ဆစ်ကို သီးခြားပိုက်ပက်အစုံ၊ စစ်ထုတ်ကိရိယာထိပ်ဖျားများ၊ ပြွန်စင်များ၊ အသစ်လက်အိတ်များ၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများနှင့် အခြားပစ္စည်းများကို အသုံးပြု၍ ဒုတိယသတ်မှတ်ထားသောနေရာတွင် ထုတ်ယူပြီး ကိုင်တွယ်ရမည်။ ဤနေရာသည် mastermix ပြွန်များ သို့မဟုတ် ပလိတ်များတွင် ပုံစံ၊ ထိန်းချုပ်ကိရိယာများနှင့် ခေတ်ရေစီးကြောင်းမျဉ်းများထည့်သွင်းရန်အတွက်လည်းဖြစ်သည်။ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာနေသော ထုတ်ယူထားသော နျူကလီးအစ်အက်ဆစ်နမူနာများ ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ရှားရန်အတွက်၊ အပြုသဘောဆောင်သော ထိန်းချုပ်ကိရိယာများ သို့မဟုတ် စံနှုန်းများကို ကိုင်တွယ်ခြင်းမပြုမီ လက်အိတ်လဲလှယ်ရန်နှင့် သီးခြားပိုက်ပက်အစုံကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုထားသည်။ PCR ဓါတ်ကူပစ္စည်းများနှင့် amplified ထုတ်ကုန်များကို ဤနေရာတွင် ပိုက်ပက်မထည့်ရပါ။ နမူနာများကို တူညီသောနေရာတွင် သတ်မှတ်ထားသော ရေခဲသေတ္တာ သို့မဟုတ် ရေခဲသေတ္တာများတွင် သိမ်းဆည်းသင့်သည်။ နမူနာအလုပ်ခွင်ကို mastermix နေရာကဲ့သို့ပင် သန့်ရှင်းရေးလုပ်သင့်သည်။

PCR ပြီးနောက်- ချဲ့ထွင်ထားသော ထုတ်ကုန်ကို ချဲ့ထွင်ခြင်းနှင့် ကိုင်တွယ်ခြင်း

ဤသတ်မှတ်ထားသောနေရာသည် post-amplification လုပ်ငန်းစဉ်များအတွက်ဖြစ်ပြီး pre-PCR ဧရိယာများနှင့် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ သီးခြားဖြစ်သင့်သည်။ ၎င်းတွင် ပုံမှန်အားဖြင့် thermocyclers များနှင့် real-time platform များပါရှိပြီး nested PCR ကို လုပ်ဆောင်နေပါက round 1 PCR ထုတ်ကုန်ကို round 2 တုံ့ပြန်မှုသို့ ထည့်သွင်းရန်အတွက် laminar flow cabinet တစ်ခုရှိသင့်သည်။ ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်မြင့်မားသောကြောင့် PCR reagents များနှင့် ထုတ်ယူထားသော nucleic acid များကို ဤနေရာတွင် ကိုင်တွယ်ခြင်းမပြုရပါ။ ဤနေရာတွင် လက်အိတ်များ၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများ၊ plate နှင့် tube racks၊ pipettes၊ filter tips၊ bins နှင့် အခြားပစ္စည်းများ သီးခြားရှိသင့်သည်။ ပြွန်များကို မဖွင့်မီ centrifuge လုပ်ရမည်။ နမူနာအလုပ်ခွင်ကို mastermix နေရာကဲ့သို့ပင် သန့်ရှင်းရေးလုပ်သင့်သည်။

PCR ပြီးနောက်- ထုတ်ကုန် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း

ဤအခန်းသည် ထုတ်ကုန်ရှာဖွေသည့် ကိရိယာများ၊ ဥပမာ ဂျယ်လျှပ်စစ်ဓာတ်အားပေးကန်များ၊ ပါဝါထုပ်များ၊ UV transilluminator နှင့် ဂျယ်စာရွက်စာတမ်းစနစ်တို့အတွက်ဖြစ်သည်။ ဤနေရာတွင် လက်အိတ်များ၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီများ၊ ပြားနှင့်ပြွန်စင်များ၊ ပိုက်ပက်များ၊ စစ်ထုတ်ကိရိယာထိပ်ဖျားများ၊ အမှိုက်ပုံးများနှင့် အခြားပစ္စည်းများ သီးခြားရှိသင့်သည်။ ဆိုးဆေးထည့်ခြင်း၊ မော်လီကျူးမာကာနှင့် agarose ဂျယ်နှင့် buffer အစိတ်အပိုင်းများမှလွဲ၍ အခြား reagents များကို ဤနေရာသို့ ယူဆောင်လာ၍မရပါ။ နမူနာအလုပ်ခွင်ကို mastermix နေရာကဲ့သို့ပင် သန့်ရှင်းရေးလုပ်သင့်သည်။

အရေးကြီးသော မှတ်ချက်

အကောင်းဆုံးကတော့ PCR ပြီးနောက် အခန်းတွေမှာ အလုပ်တွေလုပ်ပြီးသွားရင် pre-PCR အခန်းတွေကို တစ်ရက်တည်းမှာ မဝင်သင့်ပါဘူး။ ဒါက လုံးဝရှောင်လွှဲလို့မရရင် လက်ကို သေချာစွာဆေးကြောပြီး အခန်းတွေမှာ သတ်မှတ်ထားတဲ့ ဓာတ်ခွဲခန်းဝတ်စုံတွေ ဝတ်ဆင်ထားဖို့ သေချာအောင်လုပ်ပါ။ PCR ပြီးနောက် အခန်းတွေမှာ အသုံးပြုခဲ့ရင် ဓာတ်ခွဲခန်းစာအုပ်တွေနဲ့ စာရွက်စာတမ်းတွေကို pre-PCR အခန်းတွေထဲကို ယူဆောင်မသွားသင့်ပါဘူး။ လိုအပ်ရင် protocols/sample ID တွေရဲ့ မိတ္တူတွေကို print ထုတ်ထားပါ။

၄။ အထွေထွေ မော်လီကျူးဇီဝဗေဒ အကြံဉာဏ်

assay inhibition ကိုရှောင်ရှားရန် ပေါင်ဒါမပါသော လက်အိတ်များကို အသုံးပြုပါ။ ညစ်ညမ်းမှုကို လျှော့ချရန်အတွက် မှန်ကန်သော pipetting နည်းစနစ်သည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။ မှားယွင်းသော pipetting သည် အရည်များထုတ်ပေးသည့်အခါ splash များနှင့် aerosol များဖန်တီးခြင်းကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။ မှန်ကန်သော pipetting အတွက် ကောင်းမွန်သောအလေ့အကျင့်ကို အောက်ပါလင့်ခ်များတွင် ရှာဖွေနိုင်ပါသည်- Gilson pipetting လမ်းညွှန်၊ Anachem pipetting နည်းစနစ်ဗီဒီယိုများ၊ ဖွင့်ခြင်းမပြုမီ centrifuge ပြွန်များကို ဂရုတစိုက်ဖွင့်ပြီး splash များကို ရှောင်ရှားပါ။ ညစ်ညမ်းမှုများ မဝင်ရောက်စေရန် အသုံးပြုပြီးနောက် ပြွန်များကို ချက်ချင်းပိတ်ပါ။

ဓာတ်ပြုမှုများစွာကို လုပ်ဆောင်သည့်အခါ၊ ဓာတ်ပြုမှုလွှဲပြောင်းမှုအရေအတွက်ကို လျှော့ချရန်နှင့် ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်ကို လျှော့ချရန်အတွက် အသုံးများသော ဓာတ်ကူပစ္စည်းများ (ဥပမာ- ရေ၊ dNTP များ၊ ဘာဖာ၊ ပရိုင်းမာများနှင့် အင်ဇိုင်း) ပါဝင်သော mastermix တစ်ခုကို ပြင်ဆင်ပါ။ မာစတာမစ်ကို ရေခဲ သို့မဟုတ် အအေးခံထားသော ဘလောက်ပေါ်တွင် ထားရှိရန် အကြံပြုထားသည်။ Hot Start အင်ဇိုင်းကို အသုံးပြုခြင်းသည် တိကျမှုမရှိသော ထုတ်ကုန်များထုတ်လုပ်မှုကို လျှော့ချရန် ကူညီပေးနိုင်ပါသည်။ ယိုယွင်းပျက်စီးမှုကို ရှောင်ရှားရန် fluorescent probes များပါဝင်သော ဓာတ်ကူပစ္စည်းများကို အလင်းမှ ကာကွယ်ပါ။

၅။ အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုများ

ကောင်းမွန်စွာ လက္ခဏာရပ်ပြထားပြီး အတည်ပြုထားသော အပြုသဘောဆောင်သည့် နှင့် အနုတ်လက္ခဏာဆောင်သည့် ထိန်းချုပ်မှုများနှင့်အတူ တုံ့ပြန်မှုအားလုံးတွင် ပုံစံမပါသော ထိန်းချုပ်မှု နှင့် ပမာဏဆိုင်ရာ တုံ့ပြန်မှုများအတွက် multi-point titrated trendline တို့ ပါဝင်ပါသည်။ အပြုသဘောဆောင်သော ထိန်းချုပ်မှုသည် ညစ်ညမ်းမှုအန္တရာယ်ကို ဖြစ်စေနိုင်လောက်အောင် ပြင်းထန်လွန်းခြင်း မရှိသင့်ပါ။ နျူကလစ်အက်ဆစ် ထုတ်ယူခြင်းကို လုပ်ဆောင်သည့်အခါ အပြုသဘောဆောင်သော နှင့် အနုတ်လက္ခဏာဆောင်သော ထုတ်ယူမှု ထိန်းချုပ်မှုများကို ထည့်သွင်းပါ။

အသုံးပြုသူများသည် အပြုအမူဆိုင်ရာ စည်းမျဉ်းများကို သိရှိနိုင်စေရန်အတွက် နေရာတစ်ခုစီတွင် ရှင်းလင်းသော ညွှန်ကြားချက်များကို ချိတ်ဆွဲထားရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ဆေးခန်းနမူနာများတွင် DNA သို့မဟုတ် RNA အဆင့် အလွန်နိမ့်ကျနေသည်ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိသည့် ရောဂါရှာဖွေရေးဓာတ်ခွဲခန်းများသည် PCR မတိုင်မီ အခန်းများတွင် အနည်းငယ် အပေါင်းလေဖိအားနှင့် PCR ပြီးနောက် အခန်းများတွင် အနည်းငယ် အနုတ်လေဖိအားရှိသော သီးခြားလေကိုင်တွယ်မှုစနစ်များ ထားရှိခြင်း၏ အပိုလုံခြုံရေးအစီအမံကို လက်ခံကျင့်သုံးလိုပေမည်။

နောက်ဆုံးအနေနဲ့ အရည်အသွေးအာမခံချက် (QA) အစီအစဉ်တစ်ခု ရေးဆွဲခြင်းဟာ အထောက်အကူဖြစ်စေပါတယ်။ ထိုကဲ့သို့သော အစီအစဉ်တွင် reagent master stocks နှင့် working stocks စာရင်းများ၊ kits နှင့် reagents များ သိမ်းဆည်းခြင်းဆိုင်ရာ စည်းမျဉ်းများ၊ ထိန်းချုပ်မှုရလဒ်များ အစီရင်ခံခြင်း၊ ဝန်ထမ်းလေ့ကျင့်ရေးအစီအစဉ်များ၊ ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်း algorithms များနှင့် လိုအပ်သည့်အခါ ပြုပြင်မှုလုပ်ဆောင်ချက်များ ပါဝင်သင့်သည်။

၆။ စာစုစာရင်း

Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. အခန်း ၃: qPCR ဓာတ်ခွဲခန်းတစ်ခု တည်ထောင်ခြင်း။ USEPA qPCR နည်းလမ်း ၁၆၁၁ ကို အသုံးပြု၍ အပန်းဖြေရေများကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် လမ်းညွှန်စာရွက်စာတမ်း။ Lansing- Michigan State University။

အင်္ဂလန်ပြည်သူ့ကျန်းမာရေး၊ NHS။ ယူကေ အဏုဇီဝဗေဒ စုံစမ်းစစ်ဆေးမှုများအတွက် စံနှုန်းများ- မော်လီကျူး ချဲ့ထွင်မှု စမ်းသပ်မှုများ ပြုလုပ်ရာတွင် ကောင်းမွန်သော ဓာတ်ခွဲခန်း အလေ့အကျင့်)။ အရည်အသွေး လမ်းညွှန်ချက်။ 2013;4(4):1–15။

Mifflin T. PCR ဓာတ်ခွဲခန်းတစ်ခု တည်ထောင်ခြင်း။ Cold Spring Harb Protoc. 2007;7.

Schroeder S ၂၀၁၃။ စင်ထရီဖျူးဂျ်များ၏ ပုံမှန်ပြုပြင်ထိန်းသိမ်းမှု- စင်ထရီဖျူးဂျ်များ၊ ရိုတာများနှင့် အဒက်တာများကို သန့်ရှင်းရေးလုပ်ခြင်း၊ ပြုပြင်ထိန်းသိမ်းခြင်းနှင့် ပိုးသတ်ခြင်း (အဖြူရောင်စာတမ်း အမှတ် ၁၄)။ ဟမ်းဘတ်- အပ်ပန်ဒေါ့ဖ်; ၂၀၁၃။

Viana RV၊ Wallis CL။ ရောဂါရှာဖွေရေးဓာတ်ခွဲခန်းများတွင်အသုံးပြုသော မော်လီကျူးအခြေခံစစ်ဆေးမှုများအတွက် ကောင်းမွန်သော ဆေးခန်းဓာတ်ခွဲခန်းအလေ့အကျင့် (GCLP)၊ Akyar I၊ အယ်ဒီတာ။ အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု၏ ကျယ်ပြန့်သောရောင်စဉ်တန်းများ။ Rijeka၊ ခရိုအေးရှား: Intech; ၂၀၁၁: ၂၉–၅၂။