Hanyoyin gano ƙwayoyin halitta suna da ikon samar da babban adadin nucleic acid ta hanyar ƙara yawan alamun da aka samu a cikin samfurori. Duk da cewa wannan yana da amfani don ba da damar gano abubuwa masu mahimmanci, yana kuma gabatar da yiwuwar gurɓatawa ta hanyar yaɗuwar aerosols masu haɓaka abubuwa a cikin yanayin dakin gwaje-gwaje. Lokacin gudanar da gwaje-gwaje, ana iya ɗaukar matakai don guje wa gurɓatar abubuwan da ke cikin sinadarai, kayan aikin dakin gwaje-gwaje da sararin benci, saboda irin wannan gurɓatawa na iya haifar da sakamakon ƙarya-tabbatacce (ko ƙarya-tabbatacce).
Domin rage yiwuwar gurɓatawa, ya kamata a yi amfani da Kyakkyawan Ayyukan Dakunan Gwaji a kowane lokaci. Musamman, ya kamata a ɗauki matakan kariya game da waɗannan batutuwa:
1. Kula da sinadaran
2. Tsarin wurin aiki da kayan aiki
3. Shawarwari kan amfani da tsaftacewa don sararin ƙwayoyin halitta da aka ƙayyade
4. Shawarwari kan ilmin halittar kwayoyin halitta gabaɗaya
5. Sarrafa na ciki
6. Littattafan tarihi
1. Kula da sinadaran
A ɗan yi amfani da bututun reagent na centrifuge kafin a buɗe don guje wa samar da iskar gas. A yi amfani da reagent don guje wa daskarewa da gurɓatar manyan kayayyaki. A yi wa dukkan reagent da bututun reagent lakabi da kwanan wata, sannan a kula da rajistar adadin reagent da batch ɗin da aka yi amfani da su a duk gwaje-gwajen. Duk reagent da samfuran Pipette ta amfani da tips na tacewa. Kafin a saya, yana da kyau a tabbatar da cewa tips ɗin matatar sun dace da nau'in pipette da za a yi amfani da shi.
2. Tsarin wurin aiki da kayan aiki
Ya kamata a tsara wurin aiki don tabbatar da cewa aikin yana gudana a hanya ɗaya, daga wurare masu tsabta (kafin PCR) zuwa wurare masu datti (bayan PCR). Waɗannan matakan kariya na gaba ɗaya zasu taimaka wajen rage damar gurɓatawa. A sami ɗakuna daban-daban, ko aƙalla wurare daban-daban na jiki, don: shirya mastermix, cire nucleic acid da ƙara samfurin DNA, faɗaɗawa da sarrafa samfurin da aka ƙara, da kuma nazarin samfura, misali gel electrophoresis.
A wasu wurare, samun ɗakuna 4 daban yana da wahala. Zaɓin da zai yiwu amma ba shi da kyau shine a yi shirye-shiryen mastermix a cikin wurin da za a adana maganin, misali kabad ɗin kwararar laminar. Idan akwai ƙara yawan PCR a cikin gida, ya kamata a shirya mastermix don amsawar zagaye na biyu a cikin yankin 'tsabta' don shirya mastermix, amma allurar da aka yi da babban samfurin PCR ya kamata a yi a cikin ɗakin ƙarawa, kuma idan zai yiwu a cikin yankin da za a keɓe (misali kabad ɗin kwararar laminar).
Kowace ɗaki/yanki tana buƙatar saitin pipettes daban-daban, matattarar tacewa, racks na bututu, vortexes, centrifuges (idan ya dace), alkalami, reagents na dakin gwaje-gwaje na gama gari, rigunan dakin gwaje-gwaje da akwatunan safar hannu waɗanda za su kasance a wuraren aikinsu. Dole ne a wanke hannuwa kuma a canza safar hannu da rigunan dakin gwaje-gwaje lokacin da ake motsawa tsakanin wuraren da aka keɓe. Bai kamata a motsa reagents da kayan aiki daga wuri mai datti zuwa wuri mai tsabta ba. Idan wani yanayi mai tsanani ya taso inda ake buƙatar a mayar da reagent ko kayan aiki baya, dole ne a fara wanke shi da kashi 10% na sodium hypochlorite, sannan a goge shi da ruwa mai tsafta.
Bayani
Dole ne a yi amfani da maganin sodium hypochlorite mai kashi 10% sabo kowace rana. Idan ana amfani da shi don kawar da gurɓatawa, ya kamata a bi mafi ƙarancin lokacin taɓawa na minti 10.
A madadin haka, ana iya amfani da samfuran da ake samu a kasuwa waɗanda aka tabbatar da su a matsayin masu lalata gurɓatattun abubuwa masu lalata DNA idan shawarwarin aminci na gida ba su ba da damar amfani da sodium hypochlorite ba ko kuma idan sodium hypochlorite bai dace da tsaftace sassan ƙarfe na kayan aiki ba.
Mafi kyau, ma'aikata ya kamata su bi ƙa'idodin aikin da aka tsara ta hanyar hanya ɗaya, kuma kada su koma daga wurare masu datti (bayan PCR) zuwa wurare masu tsabta (kafin PCR) a rana ɗaya. Duk da haka, akwai lokutan da wannan ba makawa ba ne. Idan irin wannan yanayi ya taso, dole ne ma'aikata su kula da wanke hannuwa sosai, su canza safar hannu, su yi amfani da rigar dakin gwaje-gwaje da aka tsara kuma kada su sake gabatar da duk wani kayan aiki da za su so su fitar daga ɗakin, kamar littattafan dakin gwaje-gwaje. Ya kamata a jaddada irin waɗannan matakan kulawa a horar da ma'aikata kan hanyoyin ƙwayoyin cuta.
Bayan amfani, ya kamata a tsaftace wuraren benci da kashi 10% na sodium hypochlorite (sannan a cire ruwan da ya rage daga bleach), kashi 70% na ethanol, ko kuma wani abu mai lalata DNA da aka tabbatar da shi a kasuwa. Mafi kyau, ya kamata a sanya fitilun ultraviolet (UV) don ba da damar kawar da gurɓatawa ta hanyar amfani da hasken rana. Duk da haka, ya kamata a takaita amfani da fitilun UV zuwa wuraren aiki da aka rufe, misali kabad na aminci, domin iyakance fallasar ma'aikatan dakin gwaje-gwaje ga UV. Da fatan za a bi umarnin masana'anta don kula da fitilun UV, samun iska da tsaftacewa don tabbatar da cewa fitilun sun kasance masu inganci.
Idan ana amfani da kashi 70% na ethanol maimakon sodium hypochlorite, za a buƙaci a yi amfani da hasken UV don kammala tsarkakewar.
Kada a tsaftace vortex da centrifuge da sodium hypochlorite; maimakon haka, a goge da kashi 70% na ethanol sannan a fallasa shi ga hasken UV, ko kuma a yi amfani da maganin kashe ƙwayoyin cuta na kasuwanci mai lalata DNA. Don zubar da abubuwa, a duba tare da masana'anta don ƙarin shawara kan tsaftacewa. Idan umarnin masana'anta ya ba da izini, ya kamata a yi amfani da autoclave akai-akai a tsaftace pipettes. Idan ba za a iya cire pipettes ba, ya kamata a tsaftace su da kashi 10% na sodium hypochlorite (sannan a goge su sosai da ruwa mai tsafta) ko kuma da maganin kashe ƙwayoyin cuta na kasuwanci mai lalata DNA sannan a fallasa su ga UV.
Tsaftacewa da sinadarin sodium hypochlorite mai yawan kaso na iya lalata robobi da ƙarfe na pipette idan an yi su akai-akai; duba shawarwarin masana'anta da farko. Dole ne a daidaita dukkan kayan aiki akai-akai bisa ga jadawalin da masana'anta ta ba da shawarar. Ya kamata mutumin da aka naɗa ya kasance mai kula da tabbatar da cewa an bi jadawalin daidaitawa, an kiyaye cikakkun bayanai, kuma an nuna alamun sabis a sarari akan kayan aiki.
3. Shawarwari kan amfani da tsaftacewa don sararin ƙwayoyin halitta da aka ƙayyade
Pre-PCR: Shirya reagent alimentation/mastermix: Wannan ya kamata ya zama mafi tsafta daga cikin dukkan wurare da ake amfani da su don shirya gwaje-gwajen kwayoyin halitta kuma ya kamata ya zama kabad mai kwararar laminar wanda aka keɓe wanda ke da hasken UV. Ba dole ba ne a sarrafa samfuran, nucleic acid da aka cire da samfuran PCR a wannan yanki. Ya kamata a ajiye reagents na ƙara girma a cikin injin daskarewa (ko firiji, kamar yadda masana'anta suka ba da shawarar) a cikin wuri ɗaya da aka keɓe, mafi kyau kusa da kabad mai kwararar laminar ko yankin pre-PCR. Ya kamata a canza safar hannu a kowane lokaci bayan shiga yankin pre-PCR ko kabad mai kwararar laminar.
Ya kamata a tsaftace yankin PCR ko kabad ɗin kwararar laminar kafin amfani da shi da kuma bayan amfani kamar haka: A goge duk abubuwan da ke cikin kabad ɗin, misali pipettes, akwatunan tip, vortex, centrifuge, racks na bututu, alkalami, da sauransu tare da ethanol 70% ko wani abu mai lalata DNA na kasuwanci, sannan a bar shi ya bushe. Idan akwai wurin aiki a rufe, misali kabad ɗin kwararar laminar, a bar murfin ya shiga hasken UV na minti 30.
Bayani
Kada a fallasa sinadaran ga hasken UV; kawai a tura su cikin kabad ɗin da zarar sun yi tsafta. Idan ana yin PCR na jujjuyawar bayanai, yana iya zama da amfani a goge saman da kayan aiki da maganin da ke lalata RNAse idan an taɓa su. Wannan na iya taimakawa wajen guje wa sakamakon ƙarya mara kyau daga lalacewar enzyme na RNA. Bayan an share gurɓataccen abu kuma kafin a shirya babban mix ɗin, ya kamata a sake canza safar hannu, sannan a shirya kabad ɗin don amfani.
Kafin PCR: Ƙara samfurin cirewa/samfurin Nucleic acid:
Dole ne a cire sinadarin Nucleic acid a kuma sarrafa shi a wani yanki na daban, ta amfani da wani saitin pipette daban, tips na tacewa, racks na bututu, safar hannu sabo, kayan dakin gwaje-gwaje da sauran kayan aiki. Wannan yanki kuma don ƙara samfuri, sarrafawa da layin canzawa zuwa bututun mastermix ko faranti. Don guje wa gurɓatar samfuran nucleic acid da aka cire waɗanda ake nazari a kansu, ana ba da shawarar a canza safar hannu kafin a sarrafa ko daidaita abubuwa masu kyau kuma a yi amfani da wani saitin pipette daban. Ba dole ba ne a sanya bututun PCR da samfuran da aka ƙara a wannan yanki. Ya kamata a adana samfuran a cikin firiji ko injin daskarewa a wuri ɗaya. Ya kamata a tsaftace wurin aikin samfurin kamar yadda yake a cikin sararin mastermix.
Bayan PCR: Ƙarawa da sarrafa samfurin da aka ƙara
Wannan sarari da aka keɓe don ayyukan bayan haɓakawa ne kuma ya kamata ya kasance daban da yankunan da aka riga aka yi amfani da su kafin PCR. Yawanci yana ɗauke da na'urorin thermocyclers da dandamali na ainihin lokaci, kuma ya fi kyau ya kasance yana da kabad mai kwarara na laminar don ƙara samfurin PCR na zagaye na 1 zuwa ga amsawar zagaye na 2, idan ana yin PCR mai kauri. Ba za a iya sarrafa reagents na PCR da nucleic acid da aka fitar a wannan yanki ba tunda haɗarin gurɓatawa yana da yawa. Wannan yanki ya kamata ya sami safofin hannu daban, rigunan dakin gwaje-gwaje, rakodin faranti da bututu, pipettes, tips na tacewa, kwantena da sauran kayan aiki. Dole ne a sanya bututun centrifuge kafin buɗewa. Ya kamata a tsaftace wurin aikin samfurin kamar yadda ake yi da sararin mastermix.
Bayan PCR: Nazarin Samfura
Wannan ɗakin na kayan aikin gano samfura ne, misali tankunan gel electrophoresis, fakitin wutar lantarki, transilluminator na UV da tsarin takardun gel. Wannan yanki ya kamata ya ƙunshi safofin hannu daban-daban, rigunan dakin gwaje-gwaje, rakodin faranti da bututu, pipettes, tips na tacewa, kwantena da sauran kayan aiki. Ba za a iya kawo wasu abubuwan maye zuwa wannan yanki ba, ban da rini mai lodi, alamar kwayoyin halitta da gel na agarose, da abubuwan da ke cikin buffer. Ya kamata a tsaftace wurin aikin samfurin kamar yadda ake yi da sararin mastermix.
Muhimmin bayani
Da kyau, bai kamata a shiga ɗakunan da aka riga aka yi amfani da su kafin PCR a rana ɗaya ba idan an riga an yi aiki a ɗakunan da aka riga aka yi amfani da su bayan PCR. Idan wannan ba makawa ba ne, a tabbatar an wanke hannuwa sosai kuma an sanya takamaiman rigunan dakin gwaje-gwaje a ɗakunan. Bai kamata a shigar da littattafan dakin gwaje-gwaje da takardu cikin ɗakunan da aka riga aka yi amfani da su ba idan an yi amfani da su a ɗakunan da aka riga aka yi amfani da su bayan PCR; idan ya cancanta, a ɗauki kwafin takardu na yarjejeniya/katin shaida na samfurin, da sauransu.
4. Shawarwari kan ilmin halittar kwayoyin halitta gabaɗaya
Yi amfani da safar hannu marasa foda don gujewa hana gwajin. Kyakkyawan dabarar yin bututu yana da matuƙar muhimmanci wajen rage gurɓatawa. Yin bututun da bai dace ba na iya haifar da fesawa yayin rarraba ruwa da kuma ƙirƙirar iskar gas. Za a iya samun kyakkyawan tsari don yin bututun da ya dace a hanyoyin haɗin yanar gizo masu zuwa: Jagorar Gilson zuwa bututun, bidiyon dabarun Anachem pipetting, bututun Centrifuge kafin buɗewa, kuma a buɗe su a hankali don guje wa fesawa. Rufe bututun nan da nan bayan amfani don guje wa shigar da gurɓatattun abubuwa.
Lokacin yin martani da yawa, shirya mastermix guda ɗaya wanda ya ƙunshi reagents gama gari (misali ruwa, dNTPs, buffer, primers da enzyme) don rage yawan canja wurin reagents da rage barazanar gurɓatawa. Ana ba da shawarar a saita mastermix ɗin a kan kankara ko toshewar sanyi. Amfani da enzyme na Hot Start na iya taimakawa wajen rage samar da samfuran da ba na takamaiman ba. Kare reagents ɗin da ke ɗauke da fluorescent probes daga haske don guje wa lalacewa.
5. Sarrafa na ciki
Haɗa da ingantattun iko, tabbataccen iko da kuma rashin tsari, tare da ikon sarrafa samfuri ba tare da samfuri ba a cikin dukkan martani, da kuma layin da aka tsara don amsawar adadi mai maki da yawa. Bai kamata ikon sarrafa mai kyau ya zama mai ƙarfi har ya haifar da haɗarin gurɓatawa ba. Haɗa da ikon sarrafa cirewa mai kyau da mara kyau lokacin da ake fitar da sinadarin nucleic acid.
Ana ba da shawarar a sanya umarni bayyanannu a kowanne fanni domin masu amfani su san ƙa'idodin ɗabi'a. Dakunan gwaje-gwajen da ke gano ƙarancin matakan DNA ko RNA a cikin samfuran asibiti na iya son ɗaukar ƙarin matakan tsaro na samun tsarin sarrafa iska daban-daban tare da ɗan ƙaramin matsin iska mai kyau a cikin ɗakunan kafin PCR da kuma ɗan ƙaramin matsin iska mara kyau a cikin ɗakunan bayan PCR.
A ƙarshe, ƙirƙirar tsarin tabbatar da inganci (QA) yana da amfani. Irin wannan shirin ya kamata ya haɗa da jerin hannun jarin reagent da hannun jarin aiki, ƙa'idodi don adana kayan aiki da reagent, bayar da rahoton sakamakon sarrafawa, shirye-shiryen horar da ma'aikata, algorithms na magance matsaloli, da kuma matakan gyara idan ana buƙata.
6. Littattafan tarihi
Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. Babi na 3: Kafa dakin gwaje-gwaje na qPCR. Takardar jagora don gwada ruwan nishaɗi ta amfani da hanyar USEPA qPCR 1611. Lansing- Jami'ar Jihar Michigan.
Lafiyar Jama'a ta Ingila, NHS. Ka'idojin Burtaniya don binciken ƙwayoyin cuta: Kyakkyawan Aikin Dakunan Gwaji lokacin yin gwaje-gwajen haɓaka ƙwayoyin halitta). Jagorar Inganci. 2013;4(4):1–15.
Mifflin T. Kafa dakin gwaje-gwaje na PCR. Tsarin Cold Spring Harb. 2007;7.
Schroeder S 2013. Kula da centrifuges na yau da kullun: tsaftacewa, kulawa da kuma tsaftace centrifuges, rotors da adapters (Farin takarda mai lamba 14). Hamburg: Eppendorf; 2013.
Viana RV, Wallis CL. Kyakkyawan Aikin Dakunan Gwaji na Asibiti (GCLP) don gwaje-gwajen da aka yi amfani da su a cikin dakunan gwaje-gwaje na ganewar asali, A cikin: Akyar I, edita. Faɗin tsarin kula da inganci. Rijeka, Croatia: Intech; 2011: 29–52.
Lokacin Saƙo: Yuli-16-2020
