തന്മാത്രാ പരിശോധനയിൽ ചെയ്യേണ്ടതും ചെയ്യരുതാത്തതും

സാമ്പിളുകളിൽ കാണപ്പെടുന്ന ട്രെയ്‌സ് അളവുകളുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വഴി വലിയ അളവിൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ തന്മാത്രാ കണ്ടെത്തൽ രീതികൾക്ക് കഴിവുണ്ട്. സെൻസിറ്റീവ് ഡിറ്റക്ഷൻ പ്രാപ്തമാക്കുന്നതിന് ഇത് ഗുണകരമാണെങ്കിലും, ലബോറട്ടറി പരിതസ്ഥിതിയിൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എയറോസോളുകളുടെ വ്യാപനത്തിലൂടെ മലിനീകരണത്തിനുള്ള സാധ്യതയും ഇത് അവതരിപ്പിക്കുന്നു. പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തുമ്പോൾ, റിയാക്ടറുകൾ, ലബോറട്ടറി ഉപകരണങ്ങൾ, ബെഞ്ച് സ്ഥലം എന്നിവയുടെ മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ നടപടികൾ സ്വീകരിക്കാവുന്നതാണ്, കാരണം അത്തരം മലിനീകരണം തെറ്റായ-പോസിറ്റീവ് (അല്ലെങ്കിൽ തെറ്റായ-നെഗറ്റീവ്) ഫലങ്ങൾ സൃഷ്ടിച്ചേക്കാം.

മലിനീകരണ സാധ്യത കുറയ്ക്കുന്നതിന്, എല്ലായ്‌പ്പോഴും നല്ല ലബോറട്ടറി പരിശീലനം നടത്തണം. പ്രത്യേകിച്ചും, ഇനിപ്പറയുന്ന കാര്യങ്ങളിൽ മുൻകരുതലുകൾ എടുക്കണം:

1. റിയാജന്റുകൾ കൈകാര്യം ചെയ്യൽ
2. ജോലിസ്ഥലത്തിന്റെയും ഉപകരണങ്ങളുടെയും ഓർഗനൈസേഷൻ
3. നിയുക്ത തന്മാത്രാ സ്ഥലത്തിനായുള്ള ഉപയോഗത്തിനും വൃത്തിയാക്കലിനുമുള്ള ഉപദേശം
4. പൊതുവായ തന്മാത്രാ ജീവശാസ്ത്ര ഉപദേശം
5. ആന്തരിക നിയന്ത്രണങ്ങൾ
6. ഗ്രന്ഥസൂചി

1. റിയാജന്റുകൾ കൈകാര്യം ചെയ്യൽ

എയറോസോളുകളുടെ ഉത്പാദനം ഒഴിവാക്കാൻ തുറക്കുന്നതിന് മുമ്പ് റീജന്റ് ട്യൂബുകൾ ചുരുക്കത്തിൽ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുക. ഒന്നിലധികം ഫ്രീസ്-ഥോകളും മാസ്റ്റർ സ്റ്റോക്കുകളുടെ മലിനീകരണവും ഒഴിവാക്കാൻ ആലിക്വോട്ട് റീജന്റുകൾ. എല്ലാ റീജന്റ്, റിയാക്ഷൻ ട്യൂബുകളും വ്യക്തമായി ലേബൽ ചെയ്ത് തീയതി രേഖപ്പെടുത്തുക, എല്ലാ പരീക്ഷണങ്ങളിലും ഉപയോഗിക്കുന്ന റീജന്റ് ലോട്ടിന്റെയും ബാച്ച് നമ്പറുകളുടെയും ലോഗുകൾ സൂക്ഷിക്കുക. ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ ഉപയോഗിച്ച് എല്ലാ റീജന്റുകളും സാമ്പിളുകളും പൈപ്പറ്റ് ചെയ്യുക. വാങ്ങുന്നതിന് മുമ്പ്, ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ ഉപയോഗിക്കേണ്ട പൈപ്പറ്റിന്റെ ബ്രാൻഡിന് അനുയോജ്യമാണെന്ന് നിർമ്മാതാവുമായി സ്ഥിരീകരിക്കുന്നത് നല്ലതാണ്.

2. ജോലിസ്ഥലത്തിന്റെയും ഉപകരണങ്ങളുടെയും ഓർഗനൈസേഷൻ

വൃത്തിയുള്ള പ്രദേശങ്ങളിൽ (PCR-ന് മുമ്പ്) നിന്ന് വൃത്തികെട്ട പ്രദേശങ്ങളിലേക്ക് (PCR-ന് ശേഷം) ജോലിയുടെ ഒഴുക്ക് ഒരു ദിശയിലേക്ക് നടക്കുന്നുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ ജോലിസ്ഥലം ക്രമീകരിക്കണം. മലിനീകരണ സാധ്യത കുറയ്ക്കാൻ ഇനിപ്പറയുന്ന പൊതുവായ മുൻകരുതലുകൾ സഹായിക്കും. മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കൽ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ, DNA ടെംപ്ലേറ്റ് കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ, ആംപ്ലിഫൈഡ് ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും കൈകാര്യം ചെയ്യലും, ഉൽപ്പന്ന വിശകലനം, ഉദാ: ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ്.

ചില സാഹചര്യങ്ങളിൽ, 4 പ്രത്യേക മുറികൾ ഉണ്ടായിരിക്കുക ബുദ്ധിമുട്ടാണ്. സാധ്യമായതും എന്നാൽ അഭികാമ്യമല്ലാത്തതുമായ ഒരു ഓപ്ഷൻ മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കൽ ഒരു കണ്ടെയ്ൻമെന്റ് ഏരിയയിൽ നടത്തുക എന്നതാണ്, ഉദാഹരണത്തിന് ഒരു ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റ്. നെസ്റ്റഡ് പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ കാര്യത്തിൽ, രണ്ടാം റൗണ്ട് പ്രതികരണത്തിനുള്ള മാസ്റ്റർമിക്സിന്റെ തയ്യാറെടുപ്പ് മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കലിനായി 'ക്ലീൻ' ഏരിയയിൽ തയ്യാറാക്കണം, എന്നാൽ പ്രാഥമിക പിസിആർ ഉൽപ്പന്നവുമായുള്ള കുത്തിവയ്പ്പ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ റൂമിലും സാധ്യമെങ്കിൽ ഒരു പ്രത്യേക കണ്ടെയ്ൻമെന്റ് ഏരിയയിലും (ഉദാ. ഒരു ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റ്) നടത്തണം.

ഓരോ മുറിക്കും/ഏരിയയ്ക്കും വ്യക്തമായി ലേബൽ ചെയ്ത പൈപ്പറ്റുകൾ, ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ, ട്യൂബ് റാക്കുകൾ, വോർടെക്സുകൾ, സെൻട്രിഫ്യൂജുകൾ (പ്രസക്തമെങ്കിൽ), പേനകൾ, ജനറിക് ലാബ് റിയാജന്റുകൾ, ലാബ് കോട്ടുകൾ, അതത് വർക്ക്സ്റ്റേഷനുകളിൽ നിലനിൽക്കേണ്ട ഗ്ലൗസുകളുടെ പെട്ടികൾ എന്നിവ പ്രത്യേകം ആവശ്യമാണ്. നിയുക്ത പ്രദേശങ്ങൾക്കിടയിൽ നീങ്ങുമ്പോൾ കൈകൾ കഴുകുകയും ഗ്ലൗസുകളും ലാബ് കോട്ടുകളും മാറ്റുകയും വേണം. വൃത്തിഹീനമായ സ്ഥലത്ത് നിന്ന് വൃത്തിയുള്ള സ്ഥലത്തേക്ക് റീജന്റുകളും ഉപകരണങ്ങളും മാറ്റരുത്. ഒരു റീജന്റോ ഉപകരണത്തിന്റെ ഭാഗമോ പിന്നിലേക്ക് നീക്കേണ്ട ഒരു അങ്ങേയറ്റത്തെ സാഹചര്യം ഉണ്ടായാൽ, ആദ്യം അത് 10% സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് അണുവിമുക്തമാക്കുകയും തുടർന്ന് അണുവിമുക്തമായ വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കുകയും വേണം.

കുറിപ്പ്

10% സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് ലായനി ദിവസവും പുതുതായി തയ്യാറാക്കണം. അണുവിമുക്തമാക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, കുറഞ്ഞത് 10 മിനിറ്റ് സമ്പർക്ക സമയം പാലിക്കണം.
പ്രാദേശിക സുരക്ഷാ ശുപാർശകൾ സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റിന്റെ ഉപയോഗം അനുവദിക്കുന്നില്ലെങ്കിൽ അല്ലെങ്കിൽ ഉപകരണങ്ങളുടെ ലോഹ ഭാഗങ്ങൾ അണുവിമുക്തമാക്കുന്നതിന് സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് അനുയോജ്യമല്ലെങ്കിൽ, ഡിഎൻഎ നശിപ്പിക്കുന്ന ഉപരിതല ഡീകന്റമിനന്റുകളായി സാധുതയുള്ള വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമായ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കാം.

മാതൃകാപരമായി, ജീവനക്കാർ ഏകദിശയിലുള്ള ജോലി പ്രവാഹ തത്വങ്ങൾ പാലിക്കുകയും വൃത്തിഹീനമായ പ്രദേശങ്ങളിൽ നിന്ന് (പിസിആറിന് ശേഷം) അതേ ദിവസം തന്നെ വൃത്തിയുള്ള സ്ഥലങ്ങളിലേക്ക് (പിസിആറിന് മുമ്പ്) മടങ്ങാതിരിക്കുകയും വേണം. എന്നിരുന്നാലും, ഇത് ഒഴിവാക്കാനാവാത്ത സാഹചര്യങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം. അത്തരം സന്ദർഭങ്ങൾ ഉണ്ടാകുമ്പോൾ, കൈകൾ നന്നായി കഴുകുക, കയ്യുറകൾ മാറ്റുക, നിയുക്ത ലാബ് കോട്ട് ഉപയോഗിക്കുക, ലാബ് ബുക്കുകൾ പോലുള്ള മുറിയിൽ നിന്ന് വീണ്ടും പുറത്തെടുക്കാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്ന ഏതെങ്കിലും ഉപകരണങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കാതിരിക്കുക എന്നിവ ജീവനക്കാർ ശ്രദ്ധിക്കണം. തന്മാത്രാ രീതികളെക്കുറിച്ചുള്ള സ്റ്റാഫ് പരിശീലനത്തിൽ അത്തരം നിയന്ത്രണ നടപടികൾക്ക് പ്രാധാന്യം നൽകണം.

ഉപയോഗത്തിനുശേഷം, ബെഞ്ച് സ്‌പെയ്‌സുകൾ 10% സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് (തുടർന്ന് അവശിഷ്ട ബ്ലീച്ച് നീക്കം ചെയ്യാൻ അണുവിമുക്തമാക്കിയ വെള്ളം), 70% എത്തനോൾ, അല്ലെങ്കിൽ വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമായ ഡിഎൻഎ നശിപ്പിക്കുന്ന ഡീകന്റമിനന്റ് എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് വൃത്തിയാക്കണം. റേഡിയേഷൻ വഴി ഡീകന്റമിനേഷൻ സാധ്യമാക്കുന്നതിന് അൾട്രാ വയലറ്റ് (യുവി) വിളക്കുകൾ ഘടിപ്പിക്കുന്നതാണ് ഉത്തമം. എന്നിരുന്നാലും, ലബോറട്ടറി ജീവനക്കാരുടെ യുവി എക്സ്പോഷർ പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നതിന് യുവി വിളക്കുകളുടെ ഉപയോഗം അടച്ചിട്ട ജോലിസ്ഥലങ്ങളിൽ, ഉദാഹരണത്തിന് സുരക്ഷാ കാബിനറ്റുകളിൽ മാത്രമായി പരിമിതപ്പെടുത്തണം. വിളക്കുകൾ ഫലപ്രദമായി തുടരുന്നുവെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ യുവി വിളക്ക് പരിചരണം, വായുസഞ്ചാരം, വൃത്തിയാക്കൽ എന്നിവയ്ക്കുള്ള നിർമ്മാതാവിന്റെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക.

സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റിന് പകരം 70% എത്തനോൾ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, അണുവിമുക്തമാക്കൽ പൂർത്തിയാക്കാൻ യുവി രശ്മികൾ ഉപയോഗിച്ചുള്ള വികിരണം ആവശ്യമായി വരും.
സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വോർടെക്സും സെൻട്രിഫ്യൂജും വൃത്തിയാക്കരുത്; പകരം, 70% എത്തനോൾ ഉപയോഗിച്ച് തുടച്ച് അൾട്രാവയലറ്റ് വെളിച്ചത്തിന് വിധേയമാക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ ഒരു വാണിജ്യ ഡിഎൻഎ നശിപ്പിക്കുന്ന ഡീകണ്ടമിനന്റ് ഉപയോഗിക്കുക. ചോർച്ചകൾക്കായി, കൂടുതൽ ക്ലീനിംഗ് ഉപദേശത്തിനായി നിർമ്മാതാവിനെ ബന്ധപ്പെടുക. നിർമ്മാതാവിന്റെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുവദിക്കുകയാണെങ്കിൽ, പൈപ്പറ്റുകൾ പതിവായി ഓട്ടോക്ലേവ് ഉപയോഗിച്ച് അണുവിമുക്തമാക്കണം. പൈപ്പറ്റുകൾ ഓട്ടോക്ലേവ് ചെയ്യാൻ കഴിയുന്നില്ലെങ്കിൽ, 10% സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് (തുടർന്ന് അണുവിമുക്തമായ വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് നന്നായി തുടയ്ക്കുക) അല്ലെങ്കിൽ യുവി എക്സ്പോഷറിന് ശേഷം ഒരു വാണിജ്യ ഡിഎൻഎ നശിപ്പിക്കുന്ന ഡീകണ്ടമിനന്റ് ഉപയോഗിച്ച് വൃത്തിയാക്കിയാൽ മതിയാകും.

ഉയർന്ന ശതമാനം സോഡിയം ഹൈപ്പോക്ലോറൈറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് വൃത്തിയാക്കുന്നത് പതിവായി ചെയ്താൽ പൈപ്പറ്റ് പ്ലാസ്റ്റിക്കുകൾക്കും ലോഹങ്ങൾക്കും കേടുപാടുകൾ സംഭവിച്ചേക്കാം; ആദ്യം നിർമ്മാതാവിന്റെ ശുപാർശകൾ പരിശോധിക്കുക. നിർമ്മാതാവ് ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന ഷെഡ്യൂൾ അനുസരിച്ച് എല്ലാ ഉപകരണങ്ങളും പതിവായി കാലിബ്രേറ്റ് ചെയ്യേണ്ടതുണ്ട്. കാലിബ്രേഷൻ ഷെഡ്യൂൾ പാലിക്കുന്നുണ്ടെന്നും വിശദമായ ലോഗുകൾ പരിപാലിക്കുന്നുണ്ടെന്നും ഉപകരണങ്ങളിൽ സേവന ലേബലുകൾ വ്യക്തമായി പ്രദർശിപ്പിച്ചിട്ടുണ്ടെന്നും ഉറപ്പാക്കാൻ ഒരു നിയുക്ത വ്യക്തിയെ ചുമതലപ്പെടുത്തണം.

3. നിയുക്ത തന്മാത്രാ സ്ഥലത്തിനായുള്ള ഉപയോഗത്തിനും വൃത്തിയാക്കലിനുമുള്ള ഉപദേശം

പ്രീ-പിസിആർ: റീജന്റ് അലിക്വോട്ടിംഗ് / മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കൽ: തന്മാത്രാ പരീക്ഷണങ്ങൾ തയ്യാറാക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന എല്ലാ ഇടങ്ങളിലും ഏറ്റവും വൃത്തിയുള്ളതായിരിക്കണം ഇത്, കൂടാതെ യുവി ലൈറ്റ് ഘടിപ്പിച്ച ഒരു നിയുക്ത ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റ് ആയിരിക്കണം ഇത്. സാമ്പിളുകൾ, വേർതിരിച്ചെടുത്ത ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്, ആംപ്ലിഫൈഡ് പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ എന്നിവ ഈ പ്രദേശത്ത് കൈകാര്യം ചെയ്യാൻ പാടില്ല. ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ റിയാജന്റുകൾ ഒരു ഫ്രീസറിൽ (അല്ലെങ്കിൽ നിർമ്മാതാവിന്റെ ശുപാർശകൾ അനുസരിച്ച് റഫ്രിജറേറ്ററിൽ) അതേ നിയുക്ത സ്ഥലത്ത് സൂക്ഷിക്കണം, ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റിനോ പ്രീ-പിസിആർ ഏരിയയ്‌ക്കോ അടുത്തായി. പ്രീ-പിസിആർ ഏരിയയിലോ ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റിലോ പ്രവേശിക്കുമ്പോൾ ഓരോ തവണയും കയ്യുറകൾ മാറ്റണം.

പ്രീ-പിസിആർ ഏരിയ അല്ലെങ്കിൽ ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പും ശേഷവും ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ വൃത്തിയാക്കണം: പൈപ്പറ്റുകൾ, ടിപ്പ് ബോക്സുകൾ, വോർടെക്സ്, സെൻട്രിഫ്യൂജ്, ട്യൂബ് റാക്കുകൾ, പേനകൾ മുതലായവയിലെ എല്ലാ ഇനങ്ങളും 70% എത്തനോൾ അല്ലെങ്കിൽ ഒരു വാണിജ്യ ഡിഎൻഎ-നശിപ്പിക്കുന്ന ഡീകണ്ടമിനന്റ് ഉപയോഗിച്ച് തുടച്ച് ഉണങ്ങാൻ അനുവദിക്കുക. അടച്ചിട്ട വർക്കിംഗ് ഏരിയയുടെ കാര്യത്തിൽ, ഉദാഹരണത്തിന് ഒരു ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റിന്റെ കാര്യത്തിൽ, ഹുഡ് 30 മിനിറ്റ് യുവി വെളിച്ചത്തിൽ തുറന്നുകാട്ടുക.

കുറിപ്പ്

റിയാജന്റുകൾ അൾട്രാവയലറ്റ് രശ്മികൾക്ക് വിധേയമാക്കരുത്; കാബിനറ്റ് വൃത്തിയാക്കിയ ശേഷം മാത്രമേ അവ അതിലേക്ക് മാറ്റാവൂ. റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ PCR നടത്തുകയാണെങ്കിൽ, സമ്പർക്കത്തിൽ RNases തകർക്കുന്ന ഒരു ലായനി ഉപയോഗിച്ച് പ്രതലങ്ങളും ഉപകരണങ്ങളും തുടയ്ക്കുന്നതും സഹായകരമാകും. RNA യുടെ എൻസൈം ഡീഗ്രേഡേഷനിൽ നിന്നുള്ള തെറ്റായ-നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ ഒഴിവാക്കാൻ ഇത് സഹായിച്ചേക്കാം. ഡീകൺടമിനേഷൻ ചെയ്തതിനു ശേഷവും മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കുന്നതിനുമുമ്പ്, കയ്യുറകൾ ഒരിക്കൽ കൂടി മാറ്റണം, തുടർന്ന് കാബിനറ്റ് ഉപയോഗിക്കാൻ തയ്യാറാണ്.

പ്രീ-പിസിആർ: ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ/ടെംപ്ലേറ്റ് അഡീഷണൽ:

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുകയും കൈകാര്യം ചെയ്യുകയും ചെയ്യേണ്ടത് രണ്ടാമത്തെ പ്രത്യേക സ്ഥലത്ത് ആയിരിക്കണം, പ്രത്യേക പൈപ്പറ്റുകൾ, ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ, ട്യൂബ് റാക്കുകൾ, ഫ്രഷ് ഗ്ലൗസുകൾ, ലാബ് കോട്ടുകൾ, മറ്റ് ഉപകരണങ്ങൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച്. മാസ്റ്റർമിക്സ് ട്യൂബുകളിലേക്കോ പ്ലേറ്റുകളിലേക്കോ ടെംപ്ലേറ്റ്, നിയന്ത്രണങ്ങൾ, ട്രെൻഡ്‌ലൈനുകൾ എന്നിവ ചേർക്കുന്നതിനും ഈ പ്രദേശം ഉദ്ദേശിച്ചിട്ടുള്ളതാണ്. വിശകലനം ചെയ്യുന്ന വേർതിരിച്ചെടുത്ത ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാമ്പിളുകളുടെ മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ, പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങളോ മാനദണ്ഡങ്ങളോ കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പ് കയ്യുറകൾ മാറ്റാനും പ്രത്യേക പൈപ്പറ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കാനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. ഈ പ്രദേശത്ത് പിസിആർ റിയാജന്റുകളും ആംപ്ലിഫൈഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങളും പൈപ്പറ്റ് ചെയ്യാൻ പാടില്ല. സാമ്പിളുകൾ ഒരേ പ്രദേശത്തെ നിയുക്ത ഫ്രിഡ്ജുകളിലോ ഫ്രീസറുകളിലോ സൂക്ഷിക്കണം. മാസ്റ്റർമിക്സ് സ്ഥലം വൃത്തിയാക്കിയ അതേ രീതിയിൽ സാമ്പിൾ വർക്ക്‌സ്‌പെയ്‌സും വൃത്തിയാക്കണം.

പോസ്റ്റ്-പിസിആർ: ആംപ്ലിഫൈഡ് ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും കൈകാര്യം ചെയ്യലും

ഈ നിയുക്ത സ്ഥലം പോസ്റ്റ്-ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രക്രിയകൾക്കുള്ളതാണ്, കൂടാതെ പ്രീ-പിസിആർ മേഖലകളിൽ നിന്ന് ഭൗതികമായി വേറിട്ടുനിൽക്കണം. സാധാരണയായി ഇതിൽ തെർമോസൈക്ലറുകളും റിയൽ-ടൈം പ്ലാറ്റ്‌ഫോമുകളും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, നെസ്റ്റഡ് പിസിആർ നടത്തുകയാണെങ്കിൽ, റൗണ്ട് 1 പിസിആർ ഉൽപ്പന്നം റൗണ്ട് 2 റിയാക്ഷനിലേക്ക് ചേർക്കുന്നതിന് ഒരു ലാമിനാർ ഫ്ലോ കാബിനറ്റ് ഉണ്ടായിരിക്കണം. മലിനീകരണ സാധ്യത കൂടുതലായതിനാൽ പിസിആർ റിയാക്ടറുകളും വേർതിരിച്ചെടുത്ത ന്യൂക്ലിക് ആസിഡും ഈ പ്രദേശത്ത് കൈകാര്യം ചെയ്യാൻ പാടില്ല. ഈ പ്രദേശത്ത് കയ്യുറകൾ, ലാബ് കോട്ടുകൾ, പ്ലേറ്റ്, ട്യൂബ് റാക്കുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ, ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ, ബിന്നുകൾ, മറ്റ് ഉപകരണങ്ങൾ എന്നിവയുടെ പ്രത്യേക സെറ്റ് ഉണ്ടായിരിക്കണം. ട്യൂബുകൾ തുറക്കുന്നതിന് മുമ്പ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യണം. സാമ്പിൾ വർക്ക്‌സ്‌പെയ്‌സ് മാസ്റ്റർമിക്‌സ് സ്‌പെയ്‌സിന്റെ അതേ രീതിയിൽ വൃത്തിയാക്കണം.

പോസ്റ്റ്-പിസിആർ: ഉൽപ്പന്ന വിശകലനം

ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ടാങ്കുകൾ, പവർ പായ്ക്കുകൾ, യുവി ട്രാൻസിലുമിനേറ്റർ, ജെൽ ഡോക്യുമെന്റേഷൻ സിസ്റ്റം തുടങ്ങിയ ഉൽപ്പന്ന കണ്ടെത്തൽ ഉപകരണങ്ങൾക്കുള്ളതാണ് ഈ മുറി. ഈ ഭാഗത്ത് പ്രത്യേക സെറ്റ് കയ്യുറകൾ, ലാബ് കോട്ടുകൾ, പ്ലേറ്റ്, ട്യൂബ് റാക്കുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ, ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ, ബിന്നുകൾ, മറ്റ് ഉപകരണങ്ങൾ എന്നിവ ഉണ്ടായിരിക്കണം. ലോഡിംഗ് ഡൈ, മോളിക്യുലാർ മാർക്കർ, അഗറോസ് ജെൽ, ബഫർ ഘടകങ്ങൾ എന്നിവ ഒഴികെ മറ്റ് റിയാക്ടറുകളൊന്നും ഈ പ്രദേശത്തേക്ക് കൊണ്ടുവരാൻ കഴിയില്ല. സാമ്പിൾ വർക്ക്‌സ്‌പെയ്‌സ് മാസ്റ്റർമിക്‌സ് സ്‌പെയ്‌സ് വൃത്തിയാക്കിയ അതേ രീതിയിൽ വൃത്തിയാക്കണം.

പ്രധാന കുറിപ്പ്

പോസ്റ്റ്-പിസിആർ മുറികളിൽ ജോലി ഇതിനകം ചെയ്തിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ, പ്രീ-പിസിആർ മുറികളിൽ അതേ ദിവസം തന്നെ പ്രവേശിക്കാതിരിക്കുന്നതാണ് ഉത്തമം. ഇത് പൂർണ്ണമായും ഒഴിവാക്കാനാവാത്തതാണെങ്കിൽ, കൈകൾ ആദ്യം നന്നായി കഴുകിയിട്ടുണ്ടെന്നും മുറികളിൽ പ്രത്യേക ലാബ് കോട്ടുകൾ ധരിച്ചിട്ടുണ്ടെന്നും ഉറപ്പാക്കുക. പോസ്റ്റ്-പിസിആർ മുറികളിൽ ലാബ് പുസ്തകങ്ങളും പേപ്പർ വർക്കുകളും ഉപയോഗിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ അവ പ്രീ-പിസിആർ മുറികളിലേക്ക് കൊണ്ടുപോകരുത്; ആവശ്യമെങ്കിൽ, പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ/സാമ്പിൾ ഐഡികൾ മുതലായവയുടെ തനിപ്പകർപ്പ് പ്രിന്റ്-ഔട്ടുകൾ എടുക്കുക.

4. പൊതുവായ തന്മാത്രാ ജീവശാസ്ത്ര ഉപദേശം

പരിശോധനാ തടസ്സം ഒഴിവാക്കാൻ പൊടി രഹിത കയ്യുറകൾ ഉപയോഗിക്കുക. മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുന്നതിന് ശരിയായ പൈപ്പറ്റിംഗ് സാങ്കേതികത പരമപ്രധാനമാണ്. തെറ്റായ പൈപ്പറ്റിംഗ് ദ്രാവകങ്ങൾ വിതരണം ചെയ്യുമ്പോൾ തെറിക്കുന്നതിനും എയറോസോളുകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിനും കാരണമാകും. ശരിയായ പൈപ്പറ്റിംഗിനുള്ള നല്ല പരിശീലനം ഇനിപ്പറയുന്ന ലിങ്കുകളിൽ കാണാം: ഗിൽസൺ പൈപ്പറ്റിംഗിലേക്കുള്ള ഗൈഡ്, അനാക്കെം പൈപ്പറ്റിംഗ് ടെക്നിക് വീഡിയോകൾ, തുറക്കുന്നതിന് മുമ്പ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, തെറിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ അവ ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം തുറക്കുക. മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ ഉപയോഗത്തിന് ശേഷം ഉടൻ ട്യൂബുകൾ അടയ്ക്കുക.

ഒന്നിലധികം പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ നടത്തുമ്പോൾ, റിയാജന്റ് കൈമാറ്റങ്ങളുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുന്നതിനും മലിനീകരണ ഭീഷണി കുറയ്ക്കുന്നതിനും സാധാരണ റിയാജന്റുകൾ (ഉദാ: വെള്ളം, dNTP-കൾ, ബഫർ, പ്രൈമറുകൾ, എൻസൈം) അടങ്ങിയ ഒരു മാസ്റ്റർമിക്സ് തയ്യാറാക്കുക. ഐസിലോ ഒരു കോൾഡ് ബ്ലോക്കിലോ മാസ്റ്റർമിക്സ് സ്ഥാപിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. ഒരു ഹോട്ട് സ്റ്റാർട്ട് എൻസൈമിന്റെ ഉപയോഗം നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ഉത്പാദനം കുറയ്ക്കാൻ സഹായിച്ചേക്കാം. ഡീഗ്രഡേഷൻ ഒഴിവാക്കാൻ ഫ്ലൂറസെന്റ് പ്രോബുകൾ അടങ്ങിയ റിയാജന്റുകളെ വെളിച്ചത്തിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുക.

5. ആന്തരിക നിയന്ത്രണങ്ങൾ

നന്നായി സ്വഭാവസവിശേഷതകൾ ഉള്ളതും സ്ഥിരീകരിച്ചതുമായ പോസിറ്റീവ്, നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങൾ, എല്ലാ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളിലും ഒരു നോൺ-ടെംപ്ലേറ്റ് നിയന്ത്രണം, ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾക്കായി ഒരു മൾട്ടി-പോയിന്റ് ടൈട്രേറ്റഡ് ട്രെൻഡ്‌ലൈൻ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുത്തുക. പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം മലിനീകരണ സാധ്യത ഉണ്ടാക്കുന്ന തരത്തിൽ ശക്തമാകരുത്. ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ നടത്തുമ്പോൾ പോസിറ്റീവ്, നെഗറ്റീവ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ നിയന്ത്രണങ്ങൾ ഉൾപ്പെടുത്തുക.

പെരുമാറ്റച്ചട്ടങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഉപയോക്താക്കൾക്ക് അവബോധം നൽകുന്നതിനായി ഓരോ മേഖലയിലും വ്യക്തമായ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പോസ്റ്റ് ചെയ്യാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു. ക്ലിനിക്കൽ സാമ്പിളുകളിൽ വളരെ കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ കണ്ടെത്തുന്ന ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ലാബുകൾ, പ്രീ-പിസിആർ മുറികളിൽ നേരിയ പോസിറ്റീവ് വായു മർദ്ദവും പോസ്റ്റ്-പിസിആർ മുറികളിൽ നേരിയ നെഗറ്റീവ് വായു മർദ്ദവുമുള്ള പ്രത്യേക വായു കൈകാര്യം ചെയ്യൽ സംവിധാനങ്ങൾ ഉണ്ടായിരിക്കുന്നതിന്റെ അധിക സുരക്ഷാ നടപടി സ്വീകരിക്കാൻ ആഗ്രഹിച്ചേക്കാം.

അവസാനമായി, ഒരു ഗുണനിലവാര ഉറപ്പ് (QA) പദ്ധതി വികസിപ്പിക്കുന്നത് സഹായകരമാണ്. അത്തരമൊരു പദ്ധതിയിൽ റീജന്റ് മാസ്റ്റർ സ്റ്റോക്കുകളുടെയും വർക്കിംഗ് സ്റ്റോക്കുകളുടെയും ലിസ്റ്റുകൾ, കിറ്റുകളും റീജന്റുകളും സൂക്ഷിക്കുന്നതിനുള്ള നിയമങ്ങൾ, നിയന്ത്രണ ഫലങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യൽ, സ്റ്റാഫ് പരിശീലന പരിപാടികൾ, ട്രബിൾഷൂട്ടിംഗ് അൽഗോരിതങ്ങൾ, ആവശ്യമുള്ളപ്പോൾ പരിഹാര നടപടികൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുത്തണം.

6. ഗ്രന്ഥസൂചി

അസ്ലാൻ എ, കിൻസെൽമാൻ ജെ, ഡ്രീലിൻ ഇ, അനൻ'ഇവ ടി, ലാവണ്ടർ ജെ. അദ്ധ്യായം 3: ഒരു qPCR ലബോറട്ടറി സ്ഥാപിക്കൽ. USEPA qPCR രീതി 1611 ഉപയോഗിച്ച് വിനോദ ജലം പരിശോധിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശ രേഖ. ലാൻസിങ്- മിഷിഗൺ സ്റ്റേറ്റ് യൂണിവേഴ്സിറ്റി.

പബ്ലിക് ഹെൽത്ത് ഇംഗ്ലണ്ട്, എൻഎച്ച്എസ്. മൈക്രോബയോളജി അന്വേഷണങ്ങൾക്കായുള്ള യുകെ മാനദണ്ഡങ്ങൾ: മോളിക്യുലാർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ അസ്സേകൾ നടത്തുമ്പോൾ നല്ല ലബോറട്ടറി പ്രാക്ടീസ്). ഗുണനിലവാര മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശം. 2013;4(4):1–15.

മിഫ്ലിൻ ടി. ഒരു പിസിആർ ലബോറട്ടറി സ്ഥാപിക്കുന്നു. കോൾഡ് സ്പ്രിംഗ് ഹാർബ് പ്രോട്ടോക്. 2007;7.

ഷ്രോഡർ എസ് 2013. സെൻട്രിഫ്യൂജുകളുടെ പതിവ് അറ്റകുറ്റപ്പണികൾ: സെൻട്രിഫ്യൂജുകൾ, റോട്ടറുകൾ, അഡാപ്റ്ററുകൾ എന്നിവയുടെ വൃത്തിയാക്കൽ, പരിപാലനം, അണുവിമുക്തമാക്കൽ (വൈറ്റ് പേപ്പർ നമ്പർ 14). ഹാംബർഗ്: എപ്പെൻഡോർഫ്; 2013.

വിയാന ആർവി, വാലിസ് സിഎൽ. ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് ലബോറട്ടറികളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന മോളിക്യുലാർ അധിഷ്ഠിത പരിശോധനകൾക്കായുള്ള ഗുഡ് ക്ലിനിക്കൽ ലബോറട്ടറി പ്രാക്ടീസ് (ജിസിഎൽപി), ഇൻ: അക്യാർ I, എഡിറ്റർ. ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണത്തിന്റെ വൈഡ് സ്പെക്ട്ര. റിജേക്ക, ക്രൊയേഷ്യ: ഇന്റക്; 2011: 29–52.