ວິທີການກວດຫາໂມເລກຸນມີຄວາມສາມາດຜະລິດປະລິມານຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງອາຊິດ nucleic ໂດຍຜ່ານການຂະຫຍາຍຂອງປະລິມານການຕິດຕາມທີ່ພົບເຫັນຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ. ໃນຂະນະທີ່ນີ້ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການເຮັດໃຫ້ການກວດພົບທີ່ລະອຽດອ່ອນ, ມັນຍັງແນະນໍາຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນໂດຍຜ່ານການແຜ່ກະຈາຍຂອງ aerosols amplification ໃນສະພາບແວດລ້ອມຫ້ອງທົດລອງ. ໃນເວລາທີ່ດໍາເນີນການທົດລອງ, ສາມາດປະຕິບັດມາດຕະການເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງ reagents, ອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງແລະ bench, ເນື່ອງຈາກວ່າການປົນເປື້ອນດັ່ງກ່າວອາດຈະສ້າງ false-positive (ຫຼື false-negative).
ເພື່ອຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນ, ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີຄວນໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຕະຫຼອດເວລາ. ໂດຍສະເພາະ, ຄວນລະມັດລະວັງກ່ຽວກັບຈຸດຕໍ່ໄປນີ້:
1. ການຈັດການ reagents
2. ການຈັດຕັ້ງບ່ອນເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ
3. ການນໍາໃຊ້ແລະການທໍາຄວາມສະອາດຄໍາແນະນໍາສໍາລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກໍານົດໄວ້
4. ຄໍາແນະນໍາກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນທົ່ວໄປ
5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ
6. ບັນນານຸກົມ
1. ການຈັດການ reagents
ທໍ່ centrifuge reagent ສັ້ນໆກ່ອນທີ່ຈະເປີດເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜະລິດ aerosols. Aliquot reagents ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ freeze-taws ຫຼາຍແລະການປົນເປື້ອນຂອງຫຼັກຊັບຕົ້ນສະບັບ. ຕິດປ້າຍກຳກັບ ແລະ ກຳນົດວັນທີຂອງທໍ່ທາດ reagent ແລະ ຕິກິຣິຍາທັງໝົດຢ່າງຈະແຈ້ງ ແລະ ຮັກສາບັນທຶກຂອງ reagent lot ແລະ batch number ທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງທັງໝົດ. Pipette ທັງຫມົດ reagents ແລະຕົວຢ່າງການນໍາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ. ກ່ອນທີ່ຈະຊື້, ຄວນຢືນຢັນກັບຜູ້ຜະລິດວ່າຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງເຫມາະກັບຍີ່ຫໍ້ pipette ທີ່ຈະນໍາໃຊ້.
2. ການຈັດຕັ້ງບ່ອນເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ
ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຄວນໄດ້ຮັບການຈັດຕັ້ງເພື່ອຮັບປະກັນວ່າການໄຫຼຂອງການເຮັດວຽກເກີດຂື້ນໃນທິດທາງດຽວ, ຈາກພື້ນທີ່ສະອາດ (ກ່ອນ PCR) ໄປຫາພື້ນທີ່ເປື້ອນ (ຫຼັງ PCR). ການລະມັດລະວັງທົ່ວໄປຕໍ່ໄປນີ້ຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນໂອກາດຂອງການປົນເປື້ອນ. ມີຫ້ອງທີ່ກໍານົດໄວ້ແຍກຕ່າງຫາກ, ຫຼືຢູ່ໃນຂັ້ນຕ່ໍາຂອງພື້ນທີ່ແຍກຕ່າງຫາກທາງດ້ານຮ່າງກາຍ, ສໍາລັບ: ການກະກຽມ mastermix, ການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic ແລະການເພີ່ມແມ່ແບບ DNA, ການຂະຫຍາຍແລະການຈັດການຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ, ແລະການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ, ເຊັ່ນ: gel electrophoresis.
ໃນບາງການຕັ້ງຄ່າ, ການມີ 4 ຫ້ອງແຍກຕ່າງຫາກແມ່ນມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກ. ທາງເລືອກທີ່ເປັນໄປໄດ້ແຕ່ຄວາມປາຖະຫນາຫນ້ອຍແມ່ນການກະກຽມ mastermix ໃນພື້ນທີ່ການບັນຈຸ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ການໄຫຼ laminar. ໃນກໍລະນີຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ຮັງ, ການກະກຽມ mastermix ສໍາລັບການຕິກິຣິຍາຮອບທີສອງຄວນໄດ້ຮັບການກະກຽມໃນພື້ນທີ່ 'ສະອາດ' ສໍາລັບການກະກຽມ mastermix, ແຕ່ການ inoculation ກັບຜະລິດຕະພັນ PCR ຕົ້ນຕໍຄວນຈະເຮັດຢູ່ໃນຫ້ອງຂະຫຍາຍ, ແລະຖ້າເປັນໄປໄດ້ໃນພື້ນທີ່ບັນຈຸທີ່ອຸທິດຕົນ (ເຊັ່ນ: ຕູ້ໄຫຼ laminar).
ແຕ່ລະຫ້ອງ / ພື້ນທີ່ຕ້ອງການຊຸດທໍ່ທີ່ຕິດສະຫຼາກຢ່າງຈະແຈ້ງ, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ທໍ່ທໍ່, vortexes, centrifuges (ຖ້າກ່ຽວຂ້ອງ), ປາກກາ, ເຄື່ອງສໍາອາງຫ້ອງທົດລອງທົ່ວໄປ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງແລະກ່ອງຖົງມືທີ່ຈະຍັງຄົງຢູ່ໃນບ່ອນເຮັດວຽກຂອງພວກເຂົາ. ຕ້ອງລ້າງມື ແລະ ຖົງມື ແລະເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງປ່ຽນເມື່ອເຄື່ອນຍ້າຍລະຫວ່າງພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້. ທາດປະສົມ ແລະ ອຸປະກອນບໍ່ຄວນຖືກຍ້າຍຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນໄປຫາພື້ນທີ່ສະອາດ. ຖ້າກໍລະນີທີ່ຮຸນແຮງເກີດຂື້ນບ່ອນທີ່ reagent ຫຼືຊິ້ນສ່ວນຂອງອຸປະກອນຕ້ອງໄດ້ຮັບການຍ້າຍກັບຄືນໄປບ່ອນ, ມັນທໍາອິດຕ້ອງໄດ້ຮັບການປົນເປື້ອນດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite, ຕາມດ້ວຍເຊັດດ້ວຍນ້ໍາທີ່ບໍ່ສະອາດ.
ໝາຍເຫດ
ການແກ້ໄຂ sodium hypochlorite 10% ຕ້ອງໄດ້ຮັບການຜະລິດສົດປະຈໍາວັນ. ເມື່ອໃຊ້ສໍາລັບການປົນເປື້ອນ, ເວລາຕິດຕໍ່ຕໍາ່ສຸດທີ່ 10 ນາທີຄວນໄດ້ຮັບການຍຶດຕິດກັບ.
ອີກທາງເລືອກ, ຜະລິດຕະພັນທີ່ມີຢູ່ໃນການຄ້າທີ່ໄດ້ຮັບການຮັບຮອງວ່າເປັນສານປົນເປື້ອນພື້ນຜິວທີ່ທໍາລາຍ DNA ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ຖ້າຄໍາແນະນໍາດ້ານຄວາມປອດໄພໃນທ້ອງຖິ່ນບໍ່ອະນຸຍາດໃຫ້ໃຊ້ sodium hypochlorite ຫຼືຖ້າ sodium hypochlorite ບໍ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການປົນເປື້ອນຊິ້ນສ່ວນໂລຫະຂອງອຸປະກອນ.
ໂດຍຫລັກການແລ້ວ, ພະນັກງານຄວນປະຕິບັດຕາມ ethos ການໄຫຼວຽນຂອງການເຮັດວຽກ unidirectional ແລະບໍ່ໄປຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນ (post-PCR) ກັບຄືນໄປບ່ອນພື້ນທີ່ສະອາດ (pre-PCR) ໃນມື້ດຽວກັນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມັນອາດຈະມີບາງໂອກາດໃນເວລາທີ່ນີ້ເປັນໄປບໍ່ໄດ້. ເມື່ອມີໂອກາດດັ່ງກ່າວ, ບຸກຄະລາກອນຕ້ອງດູແລລ້າງມືຢ່າງສະອາດ, ປ່ຽນຖົງມື, ໃຊ້ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ບໍ່ໃຫ້ແນະນຳອຸປະກອນທີ່ເຂົາເຈົ້າຢາກເອົາອອກຈາກຫ້ອງອີກ ເຊັ່ນ: ປຶ້ມຫ້ອງທົດລອງ. ມາດຕະການຄວບຄຸມດັ່ງກ່າວຄວນໄດ້ຮັບການເນັ້ນຫນັກໃນການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານກ່ຽວກັບວິທີການໂມເລກຸນ.
ຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້, ສະຖານທີ່ bench ຄວນຈະໄດ້ຮັບການອະນາໄມດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite (ປະຕິບັດດ້ວຍນ້ໍາອະມັນເພື່ອເອົາສານຟອກຕົກຄ້າງ, 70% ເອທານອນ, ຫຼືມີການຜະລິດທີ່ມີການກວດສອບສານພິດທໍາລາຍ DNA. ໂດຍວິທີທາງການ, ໂຄມໄຟ ultra-violet (UV) ຄວນຖືກຕິດຕັ້ງເພື່ອໃຫ້ການປົນເປື້ອນໂດຍການ irradiation. ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການນໍາໃຊ້ໂຄມໄຟ UV ຄວນຖືກຈໍາກັດຢູ່ໃນພື້ນທີ່ເຮັດວຽກທີ່ປິດ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ນິລະໄພ, ເພື່ອຈໍາກັດການສໍາຜັດ UV ຂອງພະນັກງານຫ້ອງທົດລອງ. ກະລຸນາປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາຜູ້ຜະລິດສໍາລັບການດູແລໂຄມໄຟ UV, ການລະບາຍອາກາດແລະການທໍາຄວາມສະອາດເພື່ອຮັບປະກັນວ່າໂຄມໄຟຍັງຄົງມີປະສິດທິພາບ.
ຖ້າໃຊ້ 70% ethanol ແທນ sodium hypochlorite, ການ irradiation ກັບແສງ UV ຈະມີຄວາມຈໍາເປັນເພື່ອເຮັດໃຫ້ການປົນເປື້ອນສໍາເລັດ.
ຢ່າເຮັດຄວາມສະອາດ vortex ແລະ centrifuge ດ້ວຍ sodium hypochlorite; ແທນທີ່ຈະ, ເຊັດດ້ວຍ 70% ethanol ແລະເປີດເຜີຍໃຫ້ເຫັນກັບແສງ UV, ຫຼືໃຊ້ສານປົນເປື້ອນ DNA ທີ່ເປັນການຄ້າ. ສໍາລັບການຮົ່ວໄຫຼ, ໃຫ້ກວດເບິ່ງກັບຜູ້ຜະລິດສໍາລັບຄໍາແນະນໍາການເຮັດຄວາມສະອາດຕື່ມອີກ. ຖ້າຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດອະນຸຍາດໃຫ້ມັນ, pipettes ຄວນໄດ້ຮັບການຂ້າເຊື້ອເປັນປົກກະຕິໂດຍ autoclave. ຖ້າ pipettes ບໍ່ສາມາດ autoclaved ໄດ້, ມັນຄວນຈະພຽງພໍທີ່ຈະທໍາຄວາມສະອາດພວກມັນດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite (ປະຕິບັດຕາມໂດຍການເຊັດໃຫ້ສະອາດດ້ວຍນ້ໍາຫມັນ) ຫຼືດ້ວຍສານ decontaminant ທີ່ທໍາລາຍ DNA ທາງດ້ານການຄ້າຕາມດ້ວຍການສໍາຜັດກັບ UV.
ການເຮັດຄວາມສະອາດດ້ວຍໂຊດຽມ hypochlorite ອັດຕາສ່ວນສູງອາດຈະທໍາລາຍພາດສະຕິກ pipette ແລະໂລຫະໃນທີ່ສຸດຖ້າເຮັດເປັນປະຈໍາ; ກວດເບິ່ງຄໍາແນະນໍາຈາກຜູ້ຜະລິດກ່ອນ. ອຸປະກອນທັງຫມົດຕ້ອງໄດ້ຮັບການປັບເປັນປົກກະຕິຕາມຕາຕະລາງທີ່ຜູ້ຜະລິດແນະນໍາ. ບຸກຄົນທີ່ຖືກແຕ່ງຕັ້ງຄວນຮັບຜິດຊອບໃນການຮັບປະກັນວ່າຕາຕະລາງການສອບທຽບໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມ, ບັນທຶກລາຍລະອຽດຖືກຮັກສາໄວ້, ແລະປ້າຍບໍລິການຖືກສະແດງຢ່າງຊັດເຈນໃນອຸປະກອນ.
3. ການນໍາໃຊ້ແລະການທໍາຄວາມສະອາດຄໍາແນະນໍາສໍາລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກໍານົດໄວ້
Pre-PCR: Reagent aliquoting / mastermix ການກະກຽມ: ນີ້ຄວນຈະເປັນທີ່ສະອາດທີ່ສຸດຂອງພື້ນທີ່ທັງຫມົດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການກະກຽມການທົດລອງໂມເລກຸນແລະໂດຍສະເພາະຄວນຈະເປັນຕູ້ໄຫຼ laminar ທີ່ກໍານົດໄວ້ໂດຍມີແສງ UV. ຕົວຢ່າງ, ອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກແລະຜະລິດຕະພັນ PCR ຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນຕ້ອງບໍ່ໄດ້ຮັບການປະຕິບັດໃນພື້ນທີ່ນີ້. ທາດປະສົມການຂະຫຍາຍຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຕູ້ແຊ່ເຢັນ (ຫຼືຕູ້ເຢັນ, ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ) ໃນພື້ນທີ່ທີ່ກໍານົດໄວ້ດຽວກັນ, ເຫມາະສົມທີ່ສຸດຢູ່ໃກ້ກັບຕູ້ນ້ໍາ laminar ຫຼືພື້ນທີ່ pre-PCR. ຖົງມືຄວນໄດ້ຮັບການປ່ຽນແຕ່ລະຄັ້ງເມື່ອເຂົ້າໄປໃນພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR ຫຼືຫ້ອງນ້ໍາ laminar.
ບໍລິເວນ pre-PCR ຫຼື laminar flow ຕູ້ຄວນໄດ້ຮັບການອະນາໄມກ່ອນແລະຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ເຊັດອອກລາຍການລາຍການທັງຫມົດໃນຕູ້, ເຊັ່ນ pipettes, tip boxes, vortex, centrifuge, racks tube, pens, ແລະອື່ນໆທີ່ມີ 70% ethanol ຫຼືສານ decontaminant DNA ການຄ້າທໍາລາຍ, ແລະອະນຸຍາດໃຫ້ແຫ້ງ. ໃນກໍລະນີຂອງພື້ນທີ່ການເຮັດວຽກທີ່ປິດ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ໄຫຼ laminar, expose hood ກັບແສງ UV ສໍາລັບ 30 ນາທີ.
ໝາຍເຫດ
ບໍ່ exposing reagents ກັບແສງ UV; ພຽງແຕ່ຍ້າຍພວກມັນເຂົ້າໄປໃນຕູ້ເມື່ອມັນສະອາດ. ຖ້າປະຕິບັດ PCR reverse transcription, ມັນອາດຈະເປັນປະໂຫຍດທີ່ຈະເຊັດພື້ນຜິວແລະອຸປະກອນທີ່ມີການແກ້ໄຂທີ່ທໍາລາຍ RNases ກ່ຽວກັບການຕິດຕໍ່. ນີ້ອາດຈະຊ່ວຍຫຼີກເວັ້ນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຈາກການທໍາລາຍ enzyme ຂອງ RNA. ຫຼັງຈາກການປົນເປື້ອນແລະກ່ອນທີ່ຈະກະກຽມ mastermix, ຖົງມືຄວນໄດ້ຮັບການປ່ຽນອີກເທື່ອຫນຶ່ງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຕູ້ແມ່ນພ້ອມທີ່ຈະໃຊ້.
Pre-PCR: ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ / ການເພີ່ມແມ່ແບບ:
ອາຊິດນິວຄລີອິກຕ້ອງໄດ້ຮັບການສະກັດແລະຈັດການໃນພື້ນທີ່ກໍານົດທີສອງ, ນໍາໃຊ້ຊຸດທໍ່ແຍກຕ່າງຫາກ, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ທໍ່ທໍ່, ຖົງມືສົດ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງແລະອຸປະກອນອື່ນໆ. ພື້ນທີ່ນີ້ແມ່ນສໍາລັບການເພີ່ມເຕີມຂອງແມ່ແບບ, ການຄວບຄຸມແລະເສັ້ນ trendlines ກັບທໍ່ mastermix ຫຼືແຜ່ນ. ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກມາທີ່ກໍາລັງຖືກວິເຄາະ, ແນະນໍາໃຫ້ປ່ຽນຖົງມືກ່ອນທີ່ຈະຈັດການການຄວບຄຸມຫຼືມາດຕະຖານໃນທາງບວກແລະນໍາໃຊ້ຊຸດ pipettes ແຍກຕ່າງຫາກ. ສານເຄມີ PCR ແລະຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍພັນຈະຕ້ອງບໍ່ຖືກທໍ່ຢູ່ໃນພື້ນທີ່ນີ້. ຕົວຢ່າງຄວນຖືກເກັບໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນທີ່ກໍານົດຫຼືຕູ້ເຢັນໃນພື້ນທີ່ດຽວກັນ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.
Post-PCR: ການຂະຫຍາຍແລະການຈັດການຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ
ພື້ນທີ່ທີ່ກໍານົດນີ້ແມ່ນສໍາລັບຂະບວນການຫລັງການຂະຫຍາຍແລະຄວນຈະແຍກອອກຈາກພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR. ປົກກະຕິແລ້ວມັນປະກອບດ້ວຍເຄື່ອງຄວບຄຸມອຸນຫະພູມແລະເວທີທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ແທ້ຈິງ, ແລະໂດຍສະເພາະຄວນຈະມີຕູ້ໄຫຼ laminar ສໍາລັບການເພີ່ມຜະລິດຕະພັນ PCR ຮອບ 1 ຮອບ 2 ປະຕິກິລິຍາ, ຖ້າຫາກວ່າ PCR ຮັງໄດ້ຖືກປະຕິບັດ. ສານເຄມີ PCR ແລະອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກຈະຕ້ອງບໍ່ຖືກຈັດການຢູ່ໃນພື້ນທີ່ນີ້ເພາະວ່າຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນແມ່ນສູງ. ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນມີຖົງມືແຍກຕ່າງຫາກ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແລະທໍ່, ທໍ່ທໍ່, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ຖັງຂີ້ເຫຍື້ອແລະອຸປະກອນອື່ນໆ. ທໍ່ຕ້ອງຖືກຈຸດສູນກາງກ່ອນທີ່ຈະເປີດ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.
Post-PCR: ການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ
ຫ້ອງນີ້ແມ່ນສໍາລັບອຸປະກອນການກວດສອບຜະລິດຕະພັນ, ເຊັ່ນ: ຖັງ electrophoresis gel, ຊຸດພະລັງງານ, transilluminator UV ແລະລະບົບເອກະສານ gel. ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນຈະມີຖົງມືແຍກຕ່າງຫາກ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແລະທໍ່, ທໍ່ທໍ່, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ຖັງຂີ້ເຫຍື້ອແລະອຸປະກອນອື່ນໆ. ບໍ່ມີສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະອື່ນສາມາດຖືກນໍາເຂົ້າມາໃນພື້ນທີ່ນີ້, ບໍ່ລວມເອົາສີຍ້ອມຜ້າ, ເຄື່ອງໝາຍໂມເລກຸນ ແລະ ເຈນ agarose, ແລະສ່ວນປະກອບຂອງສານກັນບູດ. ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.
ຫມາຍເຫດສໍາຄັນ
ໂດຍຫລັກການແລ້ວ, ຫ້ອງກ່ອນ PCR ບໍ່ຄວນເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງດຽວກັນຖ້າການເຮັດວຽກໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ໃນຫ້ອງຫລັງ PCR. ຖ້າອັນນີ້ຫຼີກລ່ຽງບໍ່ໄດ້, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າລ້າງມືກ່ອນຢ່າງລະອຽດ ແລະໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງສະເພາະ. ປື້ມຫ້ອງທົດລອງແລະເອກະສານຕ້ອງບໍ່ຖືກເອົາເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ຖ້າພວກເຂົາຖືກນໍາໃຊ້ໃນຫ້ອງຫລັງ PCR; ຖ້າຈໍາເປັນ, ເອົາການພິມອອກທີ່ຊ້ໍາກັນຂອງໂປໂຕຄອນ / IDs ຕົວຢ່າງ, ແລະອື່ນໆ.
4. ຄໍາແນະນໍາກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນທົ່ວໄປ
ໃຊ້ຖົງມືທີ່ບໍ່ມີຝຸ່ນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຍັບຍັ້ງການກວດສອບ. ເຕັກນິກການທໍ່ທໍ່ທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນສໍາຄັນທີ່ສຸດເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນ. ທໍ່ທໍ່ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງສາມາດສົ່ງຜົນໃຫ້ກະແຈກກະຈາຍໃນເວລາສົ່ງຂອງແຫຼວແລະການສ້າງ aerosols. ການປະຕິບັດທີ່ດີສໍາລັບການທໍ່ທໍ່ທີ່ຖືກຕ້ອງສາມາດພົບໄດ້ຢູ່ໃນການເຊື່ອມຕໍ່ຕໍ່ໄປນີ້: Gilson ຄູ່ມືກ່ຽວກັບການ pipetting, ວິດີໂອເຕັກນິກການທໍ່ທໍ່ Anachem, ທໍ່ centrifuge ກ່ອນທີ່ຈະເປີດ, ແລະເປີດໃຫ້ເຂົາເຈົ້າລະມັດລະວັງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ splashing. ປິດທໍ່ທັນທີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແນະນໍາການປົນເປື້ອນ.
ໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາຫຼາຍ, ກະກຽມຫນຶ່ງ mastermix ທີ່ມີ reagents ທົ່ວໄປ (ເຊັ່ນ: ນ້ໍາ, dNTPs, buffer, primers ແລະ enzyme) ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຂອງການໂອນ reagent ແລະຫຼຸດຜ່ອນໄພຂົ່ມຂູ່ຂອງການປົນເປື້ອນ. ມັນແນະນໍາໃຫ້ຕັ້ງ mastermix ໃສ່ກ້ອນຫຼືກ້ອນເຢັນ. ການນໍາໃຊ້ enzyme ຂອງ Hot Start ອາດຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການຜະລິດຂອງຜະລິດຕະພັນທີ່ບໍ່ສະເພາະ. ປົກປ້ອງ reagents ທີ່ມີ fluorescent probes ຈາກແສງສະຫວ່າງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຊຸດໂຊມ.
5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ
ລວມເອົາການຄວບຄຸມທາງບວກ ແລະທາງລົບທີ່ມີລັກສະນະດີ, ຢືນຢັນ, ພ້ອມກັບການຄວບຄຸມແບບບໍ່ມີແມ່ແບບໃນປະຕິກິລິຍາທັງໝົດ, ແລະເສັ້ນແນວໂນ້ມການໄຕຣຕ໌ແບບຫຼາຍຈຸດສຳລັບປະຕິກິລິຍາດ້ານປະລິມານ. ການຄວບຄຸມທາງບວກບໍ່ຄວນມີຄວາມເຂັ້ມແຂງດັ່ງນັ້ນມັນເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ. ລວມເອົາການຄວບຄຸມການສະກັດເອົາທາງບວກແລະລົບໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic.
ແນະນໍາໃຫ້ມີຄໍາແນະນໍາທີ່ຊັດເຈນໃນແຕ່ລະພື້ນທີ່ເພື່ອໃຫ້ຜູ້ໃຊ້ຮູ້ກົດລະບຽບການປະພຶດ. ຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສທີ່ກວດພົບລະດັບ DNA ຫຼື RNA ຕໍ່າຫຼາຍໃນຕົວຢ່າງທາງຄລີນິກອາດຈະຕ້ອງການໃຊ້ມາດຕະການຄວາມປອດໄພເພີ່ມເຕີມຂອງການມີລະບົບການຈັດການທາງອາກາດແຍກຕ່າງຫາກທີ່ມີຄວາມກົດດັນອາກາດໃນທາງບວກເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ແລະຄວາມດັນອາກາດທາງລົບເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງຫລັງ PCR.
ສຸດທ້າຍ, ການສ້າງແຜນປະກັນຄຸນນະພາບ (QA) ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດ. ແຜນການດັ່ງກ່າວຄວນປະກອບມີບັນຊີລາຍຊື່ຂອງຫຼັກຊັບຕົ້ນສະບັບ reagent ແລະຫຼັກຊັບເຮັດວຽກ, ກົດລະບຽບສໍາລັບການເກັບຮັກສາຊຸດແລະ reagents, ການລາຍງານຜົນຂອງການຄວບຄຸມ, ໂຄງການການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານ, ສູດການຄິດໄລ່ບັນຫາ, ແລະການປະຕິບັດການແກ້ໄຂໃນເວລາທີ່ຈໍາເປັນ.
6. ບັນນານຸກົມ
Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. ບົດທີ 3: ການຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ qPCR. ເອກະສານແນະນໍາສໍາລັບການທົດສອບນ້ໍາພັກຜ່ອນໂດຍໃຊ້ USEPA qPCR ວິທີການ 1611. Lansing- Michigan State University.
ສາທາລະນະສຸກອັງກິດ, NHS. ມາດຕະຖານຂອງອັງກິດສໍາລັບການສືບສວນຈຸລິນຊີ: ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດການກວດສອບການຂະຫຍາຍໂມເລກຸນ). ການແນະນຳຄຸນນະພາບ. 2013;4(4:1–15).
Mifflin T. ການຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ PCR. Cold Spring Harb Protoc. 2007;7.
Schroeder S 2013. ການບໍາລຸງຮັກສາເຄື່ອງ centrifuges ປົກກະຕິ: ການທໍາຄວາມສະອາດ, ການບໍາລຸງຮັກສາແລະການຂ້າເຊື້ອຂອງ centrifuges, rotors ແລະອະແດບເຕີ (ເຈ້ຍສີຂາວສະບັບເລກທີ 14). Hamburg: Eppendorf; 2013.
Viana RV, Wallis CL. ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທາງດ້ານການຊ່ວຍທີ່ດີ (GCLP) ສໍາລັບການທົດສອບໂດຍອີງໃສ່ໂມເລກຸນທີ່ໃຊ້ໃນຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສ, ໃນ: Akyar I, ບັນນາທິການ. ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຢ່າງກວ້າງຂວາງ. Rijeka, Croatia: ອິນເທກ; 2011: 29–52.
ເວລາປະກາດ: 16-07-2020
